作者satan317 (打完回老家結婚)
看板Biotech
標題[求救] western blot internal control
時間Thu Jun 27 17:59:55 2013
因為要壓量比較少的 protein
需要 load 大量的 sample，大概 100ug
但 internal control 的部分，會黏在一起
well 與 well 間分布清楚，導致無法定量
有試過 actin 跟 tubulin 都會這樣
也試過把 sample 量降到 80ug
不過不只要壓的 protein 很淡很模糊
internal control 也還是會黏在一起
想請教版上的大大們有沒有人知道
有什麼表現量比較少的 internal control
或是經過什麼處理可以解決這個問題
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.115.48.65
1F：→ roy047:internal control另外跑一片 loading 5ug/well這樣 06/27 18:49
2F：→ satan317:可以這樣做喔!! 06/27 23:02
3F：→ xxtomnyxx:internal control 通常都是表現量海量的 house keeping 06/28 00:02
4F：→ xxtomnyxx:gene， 我會建議試試看把inter control的一抗稀釋更多倍 06/28 00:03
5F：→ satan317:有建議得量嗎 我目前試過用1:3000 跟1:1000效果差不多 06/28 02:15
6F：→ satan317:差別只在曝光時間要在久一點 但lane的寬度不變 是不夠稀 06/28 02:16
7F：→ satan317:嗎? 06/28 02:16
8F：→ a90648:我們家actin和tublin都是1:10000以上 06/28 02:26
9F：→ roy047:lane寬度不論抗體怎稀釋都不會變啊...因protein分佈就那樣 06/28 06:52
10F：→ roy047:另外跑一片然後註明都是同一管sample 但loading不同量即可 06/28 06:54
11F：→ puec2:這是因為滿出來了吧 不能改變loading量的話 建議改跑 06/28 10:49
12F：→ puec2:大片Gel 另外跑一片 感覺起來有點 "奇怪" 06/28 10:50
13F：→ roy047:看原PO老闆接不接受吧...也可以每兩格well才load一個sample 06/28 11:06
14F：→ roy047:中間空well load 1X sample buffer以隔開 06/28 11:07
15F：→ roy047:不過同一批sample如果要看超多種protein, 不可能全部只跑 06/28 11:08
16F：→ roy047:一片然後通通看完 06/28 11:08
17F：→ roy047:stripping也有次數限制 06/28 11:08
18F：→ satan317:也只好問問老闆答不答應了 06/28 13:47
19F：→ satan317:謝謝各位大大 06/28 13:47
20F：推 joseph103331:再跑一張+1 通常一個sample要跑個三四張 06/29 20:49
21F：→ joseph103331:才有辦法依據蛋白質的表現量用出適量的western條件 06/29 20:49