作者satan317 (打完回老家结婚)
看板Biotech
标题[求救] western blot internal control
时间Thu Jun 27 17:59:55 2013
因为要压量比较少的 protein
需要 load 大量的 sample，大概 100ug
但 internal control 的部分，会黏在一起
well 与 well 间分布清楚，导致无法定量
有试过 actin 跟 tubulin 都会这样
也试过把 sample 量降到 80ug
不过不只要压的 protein 很淡很模糊
internal control 也还是会黏在一起
想请教版上的大大们有没有人知道
有什麽表现量比较少的 internal control
或是经过什麽处理可以解决这个问题
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.115.48.65
1F：→ roy047:internal control另外跑一片 loading 5ug/well这样 06/27 18:49
2F：→ satan317:可以这样做喔!! 06/27 23:02
3F：→ xxtomnyxx:internal control 通常都是表现量海量的 house keeping 06/28 00:02
4F：→ xxtomnyxx:gene， 我会建议试试看把inter control的一抗稀释更多倍 06/28 00:03
5F：→ satan317:有建议得量吗 我目前试过用1:3000 跟1:1000效果差不多 06/28 02:15
6F：→ satan317:差别只在曝光时间要在久一点 但lane的宽度不变 是不够稀 06/28 02:16
7F：→ satan317:吗? 06/28 02:16
8F：→ a90648:我们家actin和tublin都是1:10000以上 06/28 02:26
9F：→ roy047:lane宽度不论抗体怎稀释都不会变啊...因protein分布就那样 06/28 06:52
10F：→ roy047:另外跑一片然後注明都是同一管sample 但loading不同量即可 06/28 06:54
11F：→ puec2:这是因为满出来了吧 不能改变loading量的话 建议改跑 06/28 10:49
12F：→ puec2:大片Gel 另外跑一片 感觉起来有点 "奇怪" 06/28 10:50
13F：→ roy047:看原PO老板接不接受吧...也可以每两格well才load一个sample 06/28 11:06
14F：→ roy047:中间空well load 1X sample buffer以隔开 06/28 11:07
15F：→ roy047:不过同一批sample如果要看超多种protein, 不可能全部只跑 06/28 11:08
16F：→ roy047:一片然後通通看完 06/28 11:08
17F：→ roy047:stripping也有次数限制 06/28 11:08
18F：→ satan317:也只好问问老板答不答应了 06/28 13:47
19F：→ satan317:谢谢各位大大 06/28 13:47
20F：推 joseph103331:再跑一张+1 通常一个sample要跑个三四张 06/29 20:49
21F：→ joseph103331:才有办法依据蛋白质的表现量用出适量的western条件 06/29 20:49