作者xavieraho (RussianDoll)
看板Biotech
標題[求救] qPCR的NTC一直有東西
時間Fri Jun 21 11:38:23 2013
大家好
最近同學做的qPCR一直不成功
她遇到的問題是
NTC和sample的melting curve peak都會出現在同一個位置
一開始覺得是水汙染，重作之後還是一樣的結果
最後連sample和primer都重新稀釋再做也是一樣結果
請問primer dimer會讓NTC跑出東西嗎?
除了以上的可能性
還有甚麼原因會導致這樣的結果?
謝謝大家
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.136.180.95
1F：→ roy047:可做一組不放primer的看看 primer dimer也會變出ds啊 06/21 11:50
2F：推 ithinksoiam:我覺得可能是primer汙染到template 06/21 11:54
3F：→ roy047:原po說primer有從stock重新稀釋了@@ 06/21 11:56
4F：推 ithinksoiam:如果sample和NTC的peak是同一個位置 應該是同一個產物 06/21 12:48
5F：→ ithinksoiam:stock也有可能會汙染阿@ @a 我有認識的就是這樣 06/21 12:49
6F：推 puec2:喔 把pipetman拿去清一清 裡面被汙染了 06/21 14:39
7F：→ puec2:這蠻常發生的 以前有聽過有人做northern 做到最後才發現 06/21 14:40
8F：→ puec2:PCR出來的probe是別種東西 汙染源就是pipetman 06/21 14:40
9F：→ puec2:你們如果很常做某個基因 比如說你抽1mg的maxiprep 06/21 14:41
10F：→ puec2:到桌上 手套上 pipetman裡面 可能都有 ng~pg的 DNA殘留 06/21 14:41
11F：→ puec2:*那麼 06/21 14:44
12F：→ puec2:還有用簡稱以前要先用全名講一遍 不然誰看得懂阿.. 06/21 14:45
13F：→ puec2:殘留的DNA對別的實驗可能沒有影響 或者影響不大 06/21 14:45
14F：→ puec2:但是對PCR這種敏感的實驗 影響就會很大 06/21 14:45
15F：→ puec2:我會建議洗完pipetman以後 都用filter tip操作qPCR 06/21 14:46
16F：推 jabari:qPCR慘物拿去跑膠啊...... 06/21 15:42
17F：→ JanChang:ntc應該有作PCR或qPCR都看的懂吧？不過先寫清楚當然較好 06/23 03:49
18F：→ kunhan1013:我有做PCR和qPCR 我就看不懂NTC是啥 06/26 02:11
19F：→ kunhan1013:可以把pipetman拿去曬曬UV 可能就會頭好壯壯 06/26 02:11
20F：推 ararthur:filter tip+1 跑膠也可以馬上看出來 size跟當初設計的一 07/30 10:34
21F：→ ararthur:樣就是primer被template汙染 有時候設計片段太小也會溫度 07/30 10:35
22F：→ ararthur:overlap 那就重設計吧 我是覺得NTC paper裡常看到啦 07/30 10:36