作者xavieraho (RussianDoll)
看板Biotech
标题[求救] qPCR的NTC一直有东西
时间Fri Jun 21 11:38:23 2013
大家好
最近同学做的qPCR一直不成功
她遇到的问题是
NTC和sample的melting curve peak都会出现在同一个位置
一开始觉得是水污染，重作之後还是一样的结果
最後连sample和primer都重新稀释再做也是一样结果
请问primer dimer会让NTC跑出东西吗?
除了以上的可能性
还有甚麽原因会导致这样的结果?
谢谢大家
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.136.180.95
1F：→ roy047:可做一组不放primer的看看 primer dimer也会变出ds啊 06/21 11:50
2F：推 ithinksoiam:我觉得可能是primer污染到template 06/21 11:54
3F：→ roy047:原po说primer有从stock重新稀释了@@ 06/21 11:56
4F：推 ithinksoiam:如果sample和NTC的peak是同一个位置 应该是同一个产物 06/21 12:48
5F：→ ithinksoiam:stock也有可能会污染阿@ @a 我有认识的就是这样 06/21 12:49
6F：推 puec2:喔 把pipetman拿去清一清 里面被污染了 06/21 14:39
7F：→ puec2:这蛮常发生的 以前有听过有人做northern 做到最後才发现 06/21 14:40
8F：→ puec2:PCR出来的probe是别种东西 污染源就是pipetman 06/21 14:40
9F：→ puec2:你们如果很常做某个基因 比如说你抽1mg的maxiprep 06/21 14:41
10F：→ puec2:到桌上 手套上 pipetman里面 可能都有 ng~pg的 DNA残留 06/21 14:41
11F：→ puec2:*那麽 06/21 14:44
12F：→ puec2:还有用简称以前要先用全名讲一遍 不然谁看得懂阿.. 06/21 14:45
13F：→ puec2:残留的DNA对别的实验可能没有影响 或者影响不大 06/21 14:45
14F：→ puec2:但是对PCR这种敏感的实验 影响就会很大 06/21 14:45
15F：→ puec2:我会建议洗完pipetman以後 都用filter tip操作qPCR 06/21 14:46
16F：推 jabari:qPCR惨物拿去跑胶啊...... 06/21 15:42
17F：→ JanChang:ntc应该有作PCR或qPCR都看的懂吧？不过先写清楚当然较好 06/23 03:49
18F：→ kunhan1013:我有做PCR和qPCR 我就看不懂NTC是啥 06/26 02:11
19F：→ kunhan1013:可以把pipetman拿去晒晒UV 可能就会头好壮壮 06/26 02:11
20F：推 ararthur:filter tip+1 跑胶也可以马上看出来 size跟当初设计的一 07/30 10:34
21F：→ ararthur:样就是primer被template污染 有时候设计片段太小也会温度 07/30 10:35
22F：→ ararthur:overlap 那就重设计吧 我是觉得NTC paper里常看到啦 07/30 10:36