作者mary1017 (阿精)
看板Biotech
標題[求救] 透析後出現白色混濁物
時間Fri Jun 14 22:57:29 2013
各位板友大家好
我的問題如下,懇請高手解答 >< 感激不盡!!
我現在做的是分離白內障眼球的蛋白質...
大致上的流程是 1.研磨眼球(使用tris-buffer pH7.4) ->2.蛋白質定量後進FPLC管柱
分離蛋白 (沖堤液tris-buffer) ->3.收集想要的蛋白質peak ->4.透析 ->5.冷凍乾燥
-->6.測CD
目前我正在進行第四步~透析
可是透析袋內出現了白色的混濁物 看起來霧霧的東西!
很害怕是蛋白質壞掉了
察網路上是: 1.可能蛋白質濃度高 (這應該不可能~ 跑完管柱的溶液濃度應該很稀吧!)
2.因為鹽類變少了,所以蛋白質聚集起來
想請問的是: 1.蛋白質壞掉了嗎? 不知道還可不可以用><
請問可以如何改善...需要離心後取上層液來作CD 這樣子? 下層不要理它
我總共透析了快三天 早知道不要放這麼久....
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◆ From: 140.116.162.76
1F：推 aggaci:透析會有沉澱析出很正常 若有逐漸換buffer沉澱會比較少 06/15 00:34
2F：→ aggaci:離心取上清液去做CD 06/15 00:35
3F：→ mary1017:%謝謝您的回答 06/15 00:35
4F：→ mary1017:後來想到我收集的是高分子量的集結體 本來水溶性就比較低 06/15 00:37
5F：→ mary1017:請問您說的逐漸換buffer是甚麼意思呢 不好意思看不太懂.. 06/15 00:38
6F：→ jeol1620:透析的功能就把純化的buf.換掉成目標的，如果純化出來沒 06/15 01:09
7F：→ jeol1620:沉墊的話直接過desalting的管柱應該也是在換buf. 但可能 06/15 01:10
8F：→ jeol1620:還是要請教專業的,萬一desalting溶解度改變column就爆了 06/15 01:11
9F：→ mary1017:我是跑完FPLC才收集TUBE作透析的 之後要冷凍乾燥 06/15 01:22
10F：→ mary1017:冷凍乾燥完 再作CD 06/15 01:22
11F：推 aggaci:假設你要從buffer A-->B就一開始從70%A+30%B逐漸換到100%B 06/15 23:55
12F：→ puec2:恭喜你 結晶了 (誤 06/17 12:50
13F：→ mary1017:有這種軟趴趴的結晶嗎? >< 生化新手...訓練心臟中 06/17 18:13
14F：→ puec2:答案就是2吧 06/17 22:42