作者mary1017 (阿精)
看板Biotech
标题[求救] 透析後出现白色混浊物
时间Fri Jun 14 22:57:29 2013
各位板友大家好
我的问题如下,恳请高手解答 >< 感激不尽!!
我现在做的是分离白内障眼球的蛋白质...
大致上的流程是 1.研磨眼球(使用tris-buffer pH7.4) ->2.蛋白质定量後进FPLC管柱
分离蛋白 (冲堤液tris-buffer) ->3.收集想要的蛋白质peak ->4.透析 ->5.冷冻乾燥
-->6.测CD
目前我正在进行第四步~透析
可是透析袋内出现了白色的混浊物 看起来雾雾的东西!
很害怕是蛋白质坏掉了
察网路上是: 1.可能蛋白质浓度高 (这应该不可能~ 跑完管柱的溶液浓度应该很稀吧!)
2.因为盐类变少了,所以蛋白质聚集起来
想请问的是: 1.蛋白质坏掉了吗? 不知道还可不可以用><
请问可以如何改善...需要离心後取上层液来作CD 这样子? 下层不要理它
我总共透析了快三天 早知道不要放这麽久....
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.162.76
1F：推 aggaci:透析会有沉淀析出很正常 若有逐渐换buffer沉淀会比较少 06/15 00:34
2F：→ aggaci:离心取上清液去做CD 06/15 00:35
3F：→ mary1017:%谢谢您的回答 06/15 00:35
4F：→ mary1017:後来想到我收集的是高分子量的集结体 本来水溶性就比较低 06/15 00:37
5F：→ mary1017:请问您说的逐渐换buffer是甚麽意思呢 不好意思看不太懂.. 06/15 00:38
6F：→ jeol1620:透析的功能就把纯化的buf.换掉成目标的，如果纯化出来没 06/15 01:09
7F：→ jeol1620:沉垫的话直接过desalting的管柱应该也是在换buf. 但可能 06/15 01:10
8F：→ jeol1620:还是要请教专业的,万一desalting溶解度改变column就爆了 06/15 01:11
9F：→ mary1017:我是跑完FPLC才收集TUBE作透析的 之後要冷冻乾燥 06/15 01:22
10F：→ mary1017:冷冻乾燥完 再作CD 06/15 01:22
11F：推 aggaci:假设你要从buffer A-->B就一开始从70%A+30%B逐渐换到100%B 06/15 23:55
12F：→ puec2:恭喜你 结晶了 (误 06/17 12:50
13F：→ mary1017:有这种软趴趴的结晶吗? >< 生化新手...训练心脏中 06/17 18:13
14F：→ puec2:答案就是2吧 06/17 22:42