作者j31yo20 (j31yo20)
看板Biotech
標題[求救] Plasmid DNA回溶方法?
時間Sun Jun 9 04:38:35 2013
各位先進版友大家好!
小弟最近在做recombinat DNA，在少量萃取plasmid DNA時，跑出來的電泳圖有點奇怪
，我懷疑是回溶時的問題，想請教各位回溶plasmid DNA時，都是怎麼回溶的?
以下是我萃取plasmid DNA的作法:
我會分別養兩種菌(分別包含不同的plasmid)，之後將1cc的菌液放入eppendorf中，離心
，之後加入solution I II III等步驟，加入95酒精後，plasmid DNA析出，再
將有plasmid DNA的eppendorf 倒置於架上，且放置室溫，將其plasmid DNA乾燥。乾燥?
使用ddH2O或者是TE buffer回溶。這裡就是我的問題: plasmid DNA是每一管eppendorf
都有，所以我不曉得要用多少體積的ddH2O或TE buffer回溶(每一管eppendorf)?
ps. 一種plasmid都差不多有六管eppendorf，所以我該將六管中的plasmid全部用30ul
的體積回溶，還是我每一管都用30ul的體積回溶，這樣就有180ul的體積，會不會使DNA
濃度很低呢?
謝謝大家的指導~~
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◆ From: 58.114.164.123
1F：→ Invec:六管一樣的plasmid為什麼不放在15mL離心管收在一起就好了? 06/09 05:26
2F：→ Invec:之後用大約250ul 的soln I重新懸浮到一管eppendorf裡 06/09 05:27
3F：→ Invec:最後用30-50uL的二次水回溶即可 (就是你說的total 30uL) 06/09 05:28
4F：→ Invec:ps 風乾那一步我會正立eppendorf上面覆擦手紙 06/09 05:30
5F：→ Invec:避免整塊plasmid掉下來:( 趕時間放65度乾浴5分鐘 覆擦手紙 06/09 05:31
6F：→ blence:文章從頭到尾看不出電泳圖哪裡奇怪(說不定並非你所認為的) 06/09 05:41
7F：→ blence:如果你只聚焦回溶這件事,越多管操作,最後流失越多阿 06/09 05:44
8F：→ j31yo20:因為我之前的回溶方式，回溶完會呈現黏稠狀 06/09 12:43
9F：→ j31yo20:假設我total要回溶到30ul，我就會平分六管，一管5ul回溶 06/09 12:45
10F：→ j31yo20:我是覺得我用太少的體積去回溶，pipeting會刮到DNA 06/09 12:46
11F：→ blence:文章還是沒有提到怎樣奇怪阿 06/09 13:25
12F：→ blence:至於文章提到擔心DNA濃度低,推文說怕黏稠,都不如直說OD濃度 06/09 13:26
13F：→ a14743535:原PO完全沒有提到電泳圖是怎樣個奇怪法阿.. 06/09 22:34
14F：推 chaunen:50ul加到第1管 溶完再吸起來加到第2管... 06/10 16:55
15F：推 iceking:每一管都用30ul回溶即可,濃度不會低的,太低也不會是體積 06/10 18:02
16F：→ iceking:的問題,比較可能是養菌的問題~ 06/10 18:03
17F：→ j31yo20:因為手邊沒有圖可以上傳，各位抱歉，很謝謝大家的建議~ 06/10 22:15
18F：→ blence:整篇回應讓我聯想到先前文章;問說手上某個蛋白的抗體不好用 06/10 22:37
19F：→ blence:想知道誰有更好的抗體,可是卻沒提自己用哪一牌?怎麼不好用? 06/10 22:38