作者j31yo20 (j31yo20)
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标题[求救] Plasmid DNA回溶方法?
时间Sun Jun 9 04:38:35 2013
各位先进版友大家好!
小弟最近在做recombinat DNA，在少量萃取plasmid DNA时，跑出来的电泳图有点奇怪
，我怀疑是回溶时的问题，想请教各位回溶plasmid DNA时，都是怎麽回溶的?
以下是我萃取plasmid DNA的作法:
我会分别养两种菌(分别包含不同的plasmid)，之後将1cc的菌液放入eppendorf中，离心
，之後加入solution I II III等步骤，加入95酒精後，plasmid DNA析出，再
将有plasmid DNA的eppendorf 倒置於架上，且放置室温，将其plasmid DNA乾燥。乾燥?
使用ddH2O或者是TE buffer回溶。这里就是我的问题: plasmid DNA是每一管eppendorf
都有，所以我不晓得要用多少体积的ddH2O或TE buffer回溶(每一管eppendorf)?
ps. 一种plasmid都差不多有六管eppendorf，所以我该将六管中的plasmid全部用30ul
的体积回溶，还是我每一管都用30ul的体积回溶，这样就有180ul的体积，会不会使DNA
浓度很低呢?
谢谢大家的指导~~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 58.114.164.123
1F：→ Invec:六管一样的plasmid为什麽不放在15mL离心管收在一起就好了? 06/09 05:26
2F：→ Invec:之後用大约250ul 的soln I重新悬浮到一管eppendorf里 06/09 05:27
3F：→ Invec:最後用30-50uL的二次水回溶即可 (就是你说的total 30uL) 06/09 05:28
4F：→ Invec:ps 风乾那一步我会正立eppendorf上面覆擦手纸 06/09 05:30
5F：→ Invec:避免整块plasmid掉下来:( 赶时间放65度乾浴5分钟 覆擦手纸 06/09 05:31
6F：→ blence:文章从头到尾看不出电泳图哪里奇怪(说不定并非你所认为的) 06/09 05:41
7F：→ blence:如果你只聚焦回溶这件事,越多管操作,最後流失越多阿 06/09 05:44
8F：→ j31yo20:因为我之前的回溶方式，回溶完会呈现黏稠状 06/09 12:43
9F：→ j31yo20:假设我total要回溶到30ul，我就会平分六管，一管5ul回溶 06/09 12:45
10F：→ j31yo20:我是觉得我用太少的体积去回溶，pipeting会刮到DNA 06/09 12:46
11F：→ blence:文章还是没有提到怎样奇怪阿 06/09 13:25
12F：→ blence:至於文章提到担心DNA浓度低,推文说怕黏稠,都不如直说OD浓度 06/09 13:26
13F：→ a14743535:原PO完全没有提到电泳图是怎样个奇怪法阿.. 06/09 22:34
14F：推 chaunen:50ul加到第1管 溶完再吸起来加到第2管... 06/10 16:55
15F：推 iceking:每一管都用30ul回溶即可,浓度不会低的,太低也不会是体积 06/10 18:02
16F：→ iceking:的问题,比较可能是养菌的问题~ 06/10 18:03
17F：→ j31yo20:因为手边没有图可以上传，各位抱歉，很谢谢大家的建议~ 06/10 22:15
18F：→ blence:整篇回应让我联想到先前文章;问说手上某个蛋白的抗体不好用 06/10 22:37
19F：→ blence:想知道谁有更好的抗体,可是却没提自己用哪一牌?怎麽不好用? 06/10 22:38