作者ai760721 (蜜汁排骨飯)
看板Biotech
標題[求救] RE digestion
時間Thu May 23 08:40:52 2013
各位前輩好
最近在cloning的時候出現很詭異的問題
我所使用的是pEGFP-C3的plasmid
因為實驗需求
須把EGFP部分以AgeI跟BglII切下
然後用klenow切平在self-ligation
但是詭異的事情出現了
我用酵素作用完跑膠然後把上面的Band切下做klenow(此時確定EGFP的band有切出來,
有看到清楚EGFP的band)
然後self-ligation, transformation, mini-culture後
想說用ApaLI跟EcoRI確認一下，去掉EGFP之後應該會得到一個約1Kb的band
沒想到竟然出現1.7K左右的Band
這不就是EGFP又長出來了ㄚㄚㄚㄚㄚ
至此實在是百思不得其解....
有沒有哪位前輩有這樣的經驗可以指點一下!!
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.125.33
1F：推 HEK293:就，你純化的所謂「上面的band」，裡面還是有很多沒切乾淨 05/23 08:54
2F：→ HEK293:我個人認為4.7k與4.0k是無法分辨的兩條 05/23 08:55
3F：→ HEK293:所以他沒有又長出來，是你根本沒切掉。 05/23 08:55
4F：推 mesenchymal:推HEK大 05/23 10:49
5F：→ puec2:多挑幾顆吧 05/23 20:09
6F：→ ai760721:挑了16顆挑到一顆了!! 05/27 18:54
7F：推 puec2:恭喜~ 06/05 11:52