作者xlg01 (異三構體蛋白質)
看板Biotech
標題[求救] RNA品質品質差可以繼續作RT嗎？
時間Tue May 7 23:33:43 2013
目前抽RNA的目的是要上Q-PCR看基因表現
處理程序為2-STEP 大致如下
1.抽RNA，定量
2.取定量RNA，逆轉錄合成cDNA
3.cDNA定量，取一定量cDNA上Q-PCR
我RNA抽壞了 也有抓了出錯原因
260/280約為1.6～1.9 應有genomicDNA污染
因為材料得來不易所以捨不得丟
而我的想法是逆轉錄的過程中也會使用有DNAse的酵素處理
且合成完之後還是會定量ssDNA的量再上機
所以我認為這樣RNA應該還是可以用
想請問版大們的意見與指教！
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◆ From: 118.168.68.50
1F：推 aceliang:1. 如何定量ssDNA? 05/07 23:42
2F：→ aceliang:2. 既然有gDNA污染，那你怎麼取定量RNA? 05/07 23:43
3F：→ aceliang:3. 假設cDNA可定量，又另取上qPCR，那何苦定量RNA做RT? 05/07 23:44
4F：→ aceliang:4. Real-time的話是RQ，定量誤差有一定的空間。 05/07 23:47
5F：→ BGG:RT 過程中有DNase 那你轉出來的 DNA 還會在嗎!!!! 05/08 00:27
6F：→ huuban:有smear就不能做Real-time，沒有smear還勉強可以 05/08 00:56
7F：→ huuban:應該是先DNase處理>>純化>>然後反轉錄，這樣比較保險/ \ 05/08 01:01
8F：推 mesenchymal:如果真的是genomic DNA的關係,然後你primer 是跨exon 05/08 08:42
9F：→ mesenchymal:那樣倒是可以試試 05/08 08:42
10F：→ untilnow:DNASE處理－＞純化 －＞反轉錄 這樣做最穩 05/08 22:11
11F：→ untilnow:多半天工 省的你日後好幾天想東想西 05/08 22:12
12F：→ hsuwenli:genomicDNA質也是260/280 05/10 18:32
13F：推 puec2:你qPCR的primer沒有設計跨intron嗎？ 05/11 10:16