作者xlg01 (异三构体蛋白质)
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标题[求救] RNA品质品质差可以继续作RT吗？
时间Tue May 7 23:33:43 2013
目前抽RNA的目的是要上Q-PCR看基因表现
处理程序为2-STEP 大致如下
1.抽RNA，定量
2.取定量RNA，逆转录合成cDNA
3.cDNA定量，取一定量cDNA上Q-PCR
我RNA抽坏了 也有抓了出错原因
260/280约为1.6～1.9 应有genomicDNA污染
因为材料得来不易所以舍不得丢
而我的想法是逆转录的过程中也会使用有DNAse的酵素处理
且合成完之後还是会定量ssDNA的量再上机
所以我认为这样RNA应该还是可以用
想请问版大们的意见与指教！
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.168.68.50
1F：推 aceliang:1. 如何定量ssDNA? 05/07 23:42
2F：→ aceliang:2. 既然有gDNA污染，那你怎麽取定量RNA? 05/07 23:43
3F：→ aceliang:3. 假设cDNA可定量，又另取上qPCR，那何苦定量RNA做RT? 05/07 23:44
4F：→ aceliang:4. Real-time的话是RQ，定量误差有一定的空间。 05/07 23:47
5F：→ BGG:RT 过程中有DNase 那你转出来的 DNA 还会在吗!!!! 05/08 00:27
6F：→ huuban:有smear就不能做Real-time，没有smear还勉强可以 05/08 00:56
7F：→ huuban:应该是先DNase处理>>纯化>>然後反转录，这样比较保险/ \ 05/08 01:01
8F：推 mesenchymal:如果真的是genomic DNA的关系,然後你primer 是跨exon 05/08 08:42
9F：→ mesenchymal:那样倒是可以试试 05/08 08:42
10F：→ untilnow:DNASE处理－＞纯化 －＞反转录 这样做最稳 05/08 22:11
11F：→ untilnow:多半天工 省的你日後好几天想东想西 05/08 22:12
12F：→ hsuwenli:genomicDNA质也是260/280 05/10 18:32
13F：推 puec2:你qPCR的primer没有设计跨intron吗？ 05/11 10:16