作者Daphnia (Daphnia)
看板Biotech
標題[求救] RAW 264.7誘導不出IL-1Beta.......
時間Thu Apr 25 20:51:51 2013
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
RAW264.7 細胞種在24孔盤5*10的五次方1 c.c.用LPS(200ng/ml)誘導24小時
用Ｒ＆Ｄ的ELISA kit DY401做
做了很多次都幾乎測不出IL-1 Beta
看了很多paper都發現條件都差不多別人做得出來我做不出來到底是怎麼回事？？？？？
還是有特殊的小技巧才做得出來
也有聽說IL-1Beta 分泌量本來就非常少很容易測不出來？？？？
誰可以救救我阿～
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.104.158
1F：推 d200190:細胞代數?Morphology還是圓形?有沒有Serum-free? 04/26 01:37
2F：→ d200190:Standard是否有跑出來?跟Control比較量? 04/26 01:38
3F：→ Daphnia:代數為從凍保管出來後第五代,有些有長腳,誘導時還是含血清 04/26 18:09
4F：→ Daphnia:10%,standard指的是？任何處理組量都低於ELISA的偵測極限 04/26 18:11
5F：推 d200190:Standard是kit內附的標準IL-1beta啊，這個有跑出來嗎? 04/27 00:21
6F：→ d200190:LPS的效價可以保證嗎?濃度有沒有錯呢?是否有提高濃度作看 04/27 00:23
7F：→ d200190:看? 04/27 00:23
8F：推 robinduck:pro-inflammatory cytokine, 試試看早一點的時間點吧! 04/27 03:48
9F：推 c1314205:LPS處理6小時 IL-1B會最大量 04/27 15:23
10F：→ c1314205:24 well 一格10的五次方 500ul/well 我做的是j774a.1 04/27 15:25
11F：→ c1314205:raw 也做得出來，raw是否活化了? 狀態好嗎? raw不好養， 04/27 15:26
12F：推 cutilis:我印象中RAW沒有ASC,所以inflammasome不會活化耶 04/27 23:57
13F：→ cutilis:用LPS最多pro-IL-1b會產生,但是要被cleaved成IL-1b需要 04/27 23:58
14F：→ cutilis:inflammasome的活化,不過這是憑印象,請再確認一下 04/27 23:59
15F：→ Daphnia:標準曲線有做出來！ 04/29 02:22
16F：→ Daphnia:所以IL–1B誘導時間6小時就可以了嗎？？怎麼感覺有點短 04/29 02:24
17F：→ Daphnia:所以IL–1B是短時間就會大量分泌嗎？我看一些paper都誘導2 04/29 02:28
18F：→ Daphnia:4小時也！？ 04/29 02:29
19F：推 hielin:RAW cell沒有ASC喔 所以即便有LPS刺激 IL-1 beta 還是無法 05/01 23:10
20F：→ hielin:secrete出細胞外喔 05/01 23:11
21F：推 c1314205:不好意思，經過討論，大家都不建議RAW測IL-1B 抱歉 囧 05/04 17:24
22F：推 jasonstudio:LPS 24小時做得出來哦 但是濃度不高哦 200pg/ml左右 05/11 01:55