作者Daphnia (Daphnia)
看板Biotech
标题[求救] RAW 264.7诱导不出IL-1Beta.......
时间Thu Apr 25 20:51:51 2013
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
RAW264.7 细胞种在24孔盘5*10的五次方1 c.c.用LPS(200ng/ml)诱导24小时
用Ｒ＆Ｄ的ELISA kit DY401做
做了很多次都几乎测不出IL-1 Beta
看了很多paper都发现条件都差不多别人做得出来我做不出来到底是怎麽回事？？？？？
还是有特殊的小技巧才做得出来
也有听说IL-1Beta 分泌量本来就非常少很容易测不出来？？？？
谁可以救救我阿～
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.104.158
1F：推 d200190:细胞代数?Morphology还是圆形?有没有Serum-free? 04/26 01:37
2F：→ d200190:Standard是否有跑出来?跟Control比较量? 04/26 01:38
3F：→ Daphnia:代数为从冻保管出来後第五代,有些有长脚,诱导时还是含血清 04/26 18:09
4F：→ Daphnia:10%,standard指的是？任何处理组量都低於ELISA的侦测极限 04/26 18:11
5F：推 d200190:Standard是kit内附的标准IL-1beta啊，这个有跑出来吗? 04/27 00:21
6F：→ d200190:LPS的效价可以保证吗?浓度有没有错呢?是否有提高浓度作看 04/27 00:23
7F：→ d200190:看? 04/27 00:23
8F：推 robinduck:pro-inflammatory cytokine, 试试看早一点的时间点吧! 04/27 03:48
9F：推 c1314205:LPS处理6小时 IL-1B会最大量 04/27 15:23
10F：→ c1314205:24 well 一格10的五次方 500ul/well 我做的是j774a.1 04/27 15:25
11F：→ c1314205:raw 也做得出来，raw是否活化了? 状态好吗? raw不好养， 04/27 15:26
12F：推 cutilis:我印象中RAW没有ASC,所以inflammasome不会活化耶 04/27 23:57
13F：→ cutilis:用LPS最多pro-IL-1b会产生,但是要被cleaved成IL-1b需要 04/27 23:58
14F：→ cutilis:inflammasome的活化,不过这是凭印象,请再确认一下 04/27 23:59
15F：→ Daphnia:标准曲线有做出来！ 04/29 02:22
16F：→ Daphnia:所以IL–1B诱导时间6小时就可以了吗？？怎麽感觉有点短 04/29 02:24
17F：→ Daphnia:所以IL–1B是短时间就会大量分泌吗？我看一些paper都诱导2 04/29 02:28
18F：→ Daphnia:4小时也！？ 04/29 02:29
19F：推 hielin:RAW cell没有ASC喔 所以即便有LPS刺激 IL-1 beta 还是无法 05/01 23:10
20F：→ hielin:secrete出细胞外喔 05/01 23:11
21F：推 c1314205:不好意思，经过讨论，大家都不建议RAW测IL-1B 抱歉 囧 05/04 17:24
22F：推 jasonstudio:LPS 24小时做得出来哦 但是浓度不高哦 200pg/ml左右 05/11 01:55