作者kattyhouse (kat)
看板Biotech
標題[求救] transfection的步驟
時間Wed Apr 17 13:56:15 2013
現在用的是santa cruz的transfection reagent和transfection medium
要用的是siRNA的系統
看到santa cruz的protocol有寫到
1.要用 antibiotic free的medium~
所以是真的不能在growth medium中加任何antibiotic嗎?
因為我家的細胞中都有加antibiotic可以直接將細胞從有antibiotic的換到沒有的嗎?
2.在transfection前，他說要用transfection medium wash過，這個步驟是有必要的嗎?
因為在transfection 過後是直接加入transtection medium+reagent+siRNA incubate
5-7hr
所以~是要照protocol寫的照做? (因為有看到說transfection前最好不要換medium)
3.這樣的做法好像是transient transfection，他是可以打下來再換到我要做實驗條件嗎?
因為第一次做，所以有以上問題想請教大家~謝謝
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◆ From: 210.60.122.160
1F：推 iceking:1. 可以直接換沒問題. 事實上,養細胞不需要加antibiotic 04/17 14:03
2F：→ iceking:2. transfection medium通常是serum free,因此wash可將原 04/17 14:04
3F：→ iceking:本的serum洗去,建議照protocol做~ 04/17 14:04
4F：→ blence:lipo2000,fugene hd, turbofect等不少家都不需要serum free 04/17 14:59
5F：→ puec2:serum free效率比較高啦 04/18 13:45
6F：→ puec2:沒用過santa cruz但是lipo2000就很好用了 04/18 13:45
7F：→ puec2:Fugene HD前幾年QC不穩 後來換掉 Turbofect的毒性有點科科 04/18 13:46
8F：→ puec2:如果要送大量plasmid要用到大量transfection reagent的時候 04/18 13:46
9F：→ puec2:要考慮一下 現在都用TransIT 2020 超好用! 04/18 13:47
10F：→ puec2:lipo2000我都是用來送RNA(>10K) 04/18 13:47
11F：→ puec2:siRNA你送進去應該過幾天就失效了吧? 04/18 13:49
12F：→ puec2:除非你送得是shRNA可以用抗生素篩選有帶plasmid的細胞 04/18 13:50