作者kattyhouse (kat)
看板Biotech
标题[求救] transfection的步骤
时间Wed Apr 17 13:56:15 2013
现在用的是santa cruz的transfection reagent和transfection medium
要用的是siRNA的系统
看到santa cruz的protocol有写到
1.要用 antibiotic free的medium~
所以是真的不能在growth medium中加任何antibiotic吗?
因为我家的细胞中都有加antibiotic可以直接将细胞从有antibiotic的换到没有的吗?
2.在transfection前，他说要用transfection medium wash过，这个步骤是有必要的吗?
因为在transfection 过後是直接加入transtection medium+reagent+siRNA incubate
5-7hr
所以~是要照protocol写的照做? (因为有看到说transfection前最好不要换medium)
3.这样的做法好像是transient transfection，他是可以打下来再换到我要做实验条件吗?
因为第一次做，所以有以上问题想请教大家~谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 210.60.122.160
1F：推 iceking:1. 可以直接换没问题. 事实上,养细胞不需要加antibiotic 04/17 14:03
2F：→ iceking:2. transfection medium通常是serum free,因此wash可将原 04/17 14:04
3F：→ iceking:本的serum洗去,建议照protocol做~ 04/17 14:04
4F：→ blence:lipo2000,fugene hd, turbofect等不少家都不需要serum free 04/17 14:59
5F：→ puec2:serum free效率比较高啦 04/18 13:45
6F：→ puec2:没用过santa cruz但是lipo2000就很好用了 04/18 13:45
7F：→ puec2:Fugene HD前几年QC不稳 後来换掉 Turbofect的毒性有点科科 04/18 13:46
8F：→ puec2:如果要送大量plasmid要用到大量transfection reagent的时候 04/18 13:46
9F：→ puec2:要考虑一下 现在都用TransIT 2020 超好用! 04/18 13:47
10F：→ puec2:lipo2000我都是用来送RNA(>10K) 04/18 13:47
11F：→ puec2:siRNA你送进去应该过几天就失效了吧? 04/18 13:49
12F：→ puec2:除非你送得是shRNA可以用抗生素筛选有带plasmid的细胞 04/18 13:50