作者cdkcyclin (ilovesuju)
看板Biotech
標題[求救] 請問plasmid cotransfection的問題?
時間Mon Apr 15 00:31:30 2013
想請問各位是否遇過類似的問題，
我將兩個等量的plasmid同時利用lipofectime2000 transfect到HEK293細胞中
但是每次都是某個plasmid的表現量很低
有時候甚至沒有表現
一開始我懷疑是不是plasmid有問題
所以重新做了maxi prep 也送了定序
都是ok的
想請各位有遇過類似的問題嗎?
或者可以給我一點建議呢?
謝謝!!
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◆ From: 95.117.122.145
※ 編輯: cdkcyclin 來自: 95.117.122.145 (04/15 00:32)
1F：→ blence:single transfec應該是正常的吧,為什麼會懷疑sequence有錯? 04/15 02:39
2F：→ blence:如果是因為single transfec表現量就不正常,那標題明顯誤導 04/15 02:41
3F：→ blence:一般來說cotransfec有干擾很常見,連plasmid跟si一起放也會 04/15 02:46
4F：推 joseph103331:正常 干擾也有可能是表現的競爭 04/15 17:26
5F：→ joseph103331:看你的實驗目的是什麼 有時候量不同沒關係 有時候有 04/15 17:26
6F：→ puec2:會耶 我送兩個plasmid也常常遇到一個很強另一個很弱的 04/15 20:17
7F：→ puec2:如果兩個plasmid用不同promoter會好一點嗎? 04/15 20:17
8F：→ a90648:會，用同一個就變成競爭啦 04/16 09:45
9F：→ puec2:但是這樣一口氣要改24個plasmid...想到就懶 04/16 12:27
10F：→ puec2:最神奇的是我的control不管怎麼表現 兩個plasmid的表現量 04/16 12:27
11F：→ puec2:一直都很穩定 只有實驗組會有表現不平均的情形 04/16 12:27
12F：推 chaunen:藥會影響protein stability? 04/16 19:14