第一次在此板發文，文似乎有點長 ----------------------------- 自從Clone了大小有15kb之譜的質體成功之後 就跟老闆請求訂購可以訂出10kb以上的DNA marker 訂的是「Thermo GeneRuler High Range DNA Ladder」 一直以來實驗室都只有用過1kb、100bp的DNA marker 因為兩種marker的用法大同小異(1kb用1% agarose gel、100bp用2% agarose gel) 當High Range DNA Ladder送來的時候，他是需要自行添加6X loadding dye的 而說明書上也有建議的比例配法，而使用的Gel也建議0.4% 因為製膠檯有限，怕會混淆其他人使用，所以先使用了1% gel下去跑100V,1hr左右 結果跑出來發現Marker並沒有被跑開，整個是混在一起的 (有以1kb下去做對照，1kb是成功跑開了) 之後只好配置一批0.4%的Gel再跑一次100V,1hr，還是無法跑開 之後試過用了50V去跑1hr，結果是一樣的 在此提供一下說明書上的建議 「1X TAE」、「0.4%(low percentage) agarose gel」 「3V/cm 1.5h」、「0.4ug/lane」、「8cm length gel」 我們實驗室用的一直是1X TAE、0.4% Gel有另外配過、 3V/cm則是因為機器的關係只有50V和100V可以選擇， 0.4ug/lane的量一直是夠的 整個有差別的則是 8cm length gel， 由於器材的關係，我們實驗室只能配的出小於8cm 的膠 --------------------------------- 我想請問， 對於我使用了這種大範圍的DNA marker的方法上還有甚麼遺漏的地方 除了8cm gel比較不太可能配的出來之外， 有辦法使用現有的器材讓他漂亮的跑開嗎? --

※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 111.252.105.63 是運氣好剛好挑到成功的 pBR322(4K)+Neomycine gene(1.5k)+DsRed(0.7k)+Viral Nonstructure protein(9K) 有試過以0.4% gel 100V 跑上1h20min左右(放著跑去買午餐)， 整個Band已經跑到膠的四分之三處，但是還是無法跑開他們 ※ 編輯: fvf 來自: 111.252.105.63 (04/05 03:30)