第一次在此板发文，文似乎有点长 ----------------------------- 自从Clone了大小有15kb之谱的质体成功之後 就跟老板请求订购可以订出10kb以上的DNA marker 订的是「Thermo GeneRuler High Range DNA Ladder」 一直以来实验室都只有用过1kb、100bp的DNA marker 因为两种marker的用法大同小异(1kb用1% agarose gel、100bp用2% agarose gel) 当High Range DNA Ladder送来的时候，他是需要自行添加6X loadding dye的 而说明书上也有建议的比例配法，而使用的Gel也建议0.4% 因为制胶台有限，怕会混淆其他人使用，所以先使用了1% gel下去跑100V,1hr左右 结果跑出来发现Marker并没有被跑开，整个是混在一起的 (有以1kb下去做对照，1kb是成功跑开了) 之後只好配置一批0.4%的Gel再跑一次100V,1hr，还是无法跑开 之後试过用了50V去跑1hr，结果是一样的 在此提供一下说明书上的建议 「1X TAE」、「0.4%(low percentage) agarose gel」 「3V/cm 1.5h」、「0.4ug/lane」、「8cm length gel」 我们实验室用的一直是1X TAE、0.4% Gel有另外配过、 3V/cm则是因为机器的关系只有50V和100V可以选择， 0.4ug/lane的量一直是够的 整个有差别的则是 8cm length gel， 由於器材的关系，我们实验室只能配的出小於8cm 的胶 --------------------------------- 我想请问， 对於我使用了这种大范围的DNA marker的方法上还有甚麽遗漏的地方 除了8cm gel比较不太可能配的出来之外， 有办法使用现有的器材让他漂亮的跑开吗? --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 111.252.105.63 是运气好刚好挑到成功的 pBR322(4K)+Neomycine gene(1.5k)+DsRed(0.7k)+Viral Nonstructure protein(9K) 有试过以0.4% gel 100V 跑上1h20min左右(放着跑去买午餐)， 整个Band已经跑到胶的四分之三处，但是还是无法跑开他们 ※ 编辑: fvf 来自: 111.252.105.63 (04/05 03:30)