作者allisa (小晴)
看板Biotech
標題[求救] primary culture cell 不太貼?
時間Thu Apr 4 22:32:30 2013
目前是從skin中分離出keratinocyte跟fibroblast
用的是trypsin跟collagenase
但是處理過分離出來的細胞都不會攤開
都還是一顆一顆圓圓的 會有些沉在底部 可能有稍微黏住
因為我換medium後還是會有剩下的細胞
搖晃dish也不會所有的細胞都一起晃
請問有沒有人有經驗? 這樣有養成功嗎? 我要繼續等他貼嗎?
謝謝
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◆ From: 1.173.164.209
1F：推 im9527tw:collagenase有去除掉嗎? 要去除掉細胞才會貼 04/04 23:04
2F：→ allisa:有用中和enzyme的一種buffer洗過了 04/05 00:09
3F：推 caesar0926:有沒有說需要coating 什麼東西啊 04/05 01:39
4F：→ raiyu:dish coating呢? 04/05 05:21
5F：推 leoblack:Dish先coating poly-Lys ? 04/05 12:28
6F：→ allisa:protocol上沒特別說明 請問要coating的話要怎麼選擇? 04/05 19:58
7F：推 abcam:可以用特別加強貼附的Dish coring、BD、Greniner 都有呀! 04/06 19:59
8F：推 im9527tw:medium的配方呢?我養都用一般culture dish,但之前未抓到 04/08 09:30
9F：→ im9527tw:fibroblast所需營養時也都不太貼 04/08 09:31
10F：→ allisa:我有換corning的CellBind dish養也是差不多 medium用 04/08 15:02
11F：→ allisa:fibroblast: HG DMEM+10%FBS(+sodium pyruvate) 04/08 15:03
12F：→ allisa:keratinocyte:用gibco出的一種專門養keratinocyte SFM 04/08 15:05
13F：推 csmceddie:我之前也有遇到相同問題 後來coating collagen可以改善 04/08 15:32
14F：→ csmceddie:貼的問題 不過keratinocyte還是只能長十幾天 卡關中 04/08 15:34
15F：→ csmceddie:我是收mouse的 用dispase 04/08 15:35
16F：→ allisa:C大握手! 一起加油! 04/08 17:04
17F：推 bigcat24:fibroblast的話 放久一點 +F12 or 20%FBS 04/11 12:44