作者allisa (小晴)
看板Biotech
标题[求救] primary culture cell 不太贴?
时间Thu Apr 4 22:32:30 2013
目前是从skin中分离出keratinocyte跟fibroblast
用的是trypsin跟collagenase
但是处理过分离出来的细胞都不会摊开
都还是一颗一颗圆圆的 会有些沉在底部 可能有稍微黏住
因为我换medium後还是会有剩下的细胞
摇晃dish也不会所有的细胞都一起晃
请问有没有人有经验? 这样有养成功吗? 我要继续等他贴吗?
谢谢
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 1.173.164.209
1F：推 im9527tw:collagenase有去除掉吗? 要去除掉细胞才会贴 04/04 23:04
2F：→ allisa:有用中和enzyme的一种buffer洗过了 04/05 00:09
3F：推 caesar0926:有没有说需要coating 什麽东西啊 04/05 01:39
4F：→ raiyu:dish coating呢? 04/05 05:21
5F：推 leoblack:Dish先coating poly-Lys ? 04/05 12:28
6F：→ allisa:protocol上没特别说明 请问要coating的话要怎麽选择? 04/05 19:58
7F：推 abcam:可以用特别加强贴附的Dish coring、BD、Greniner 都有呀! 04/06 19:59
8F：推 im9527tw:medium的配方呢?我养都用一般culture dish,但之前未抓到 04/08 09:30
9F：→ im9527tw:fibroblast所需营养时也都不太贴 04/08 09:31
10F：→ allisa:我有换corning的CellBind dish养也是差不多 medium用 04/08 15:02
11F：→ allisa:fibroblast: HG DMEM+10%FBS(+sodium pyruvate) 04/08 15:03
12F：→ allisa:keratinocyte:用gibco出的一种专门养keratinocyte SFM 04/08 15:05
13F：推 csmceddie:我之前也有遇到相同问题 後来coating collagen可以改善 04/08 15:32
14F：→ csmceddie:贴的问题 不过keratinocyte还是只能长十几天 卡关中 04/08 15:34
15F：→ csmceddie:我是收mouse的 用dispase 04/08 15:35
16F：→ allisa:C大握手! 一起加油! 04/08 17:04
17F：推 bigcat24:fibroblast的话 放久一点 +F12 or 20%FBS 04/11 12:44