作者hsin37 (因禍得福???)
看板Biotech
標題[求救] Trizol抽RNA~
時間Mon Apr 1 18:04:23 2013
想請問各位前輩
使用Trizol抽"植物"RNA時
在Agaross gel 上 28s:18s rRNA的比例有辦法到1.8~2.0嗎?
最近在做real-time PCR,但是biological repeat間的error bar很大
再想是否與RNA的品質有關
文獻上說rRNA的比例要到1.8~2.0
可是我們實驗室抽出來都只有1 >"<
......我們老師說磨的時候用力一點.....就會抽得比較好.....
可是我很懷疑啊~~~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 133.50.190.84
1F：→ iceking:RNA超容易degrade 也許有關~ 04/01 18:27
2F：→ huuban:是指QC的ratio嗎？那個有時候跟物種有關 04/01 18:30
3F：→ huuban:磨得細應該是回收量比較大吧..個人認為只要有磨還是可以抽 04/01 18:31
4F：→ emilylienya:磨到很細有用喔!以前Lab也碰過類似的問題 04/01 21:32
5F：→ chougham:我會再用DNASE I處理~然後用PHENOL-CHLOROFORM萃一遍 04/01 21:55
6F：→ hsin37:有做DNase處理跟再萃取，以吸光值來看是沒有問題>"<但是就 04/02 11:21
7F：→ hsin37:好像被分解掉了~那磨sample是on ice嗎?ambion的protocol是 04/02 11:24
8F：→ hsin37:常溫磨，我有點不太理解...這步會有很嚴重的影響嗎? 04/02 11:25
9F：→ huuban:我習慣加液氮磨耶 04/02 13:23
10F：→ huuban:你有gel圖可以讓大家看看嗎？ 04/02 13:24
11F：推 kunhan1013:液態氮磨 +1 04/11 14:26
12F：推 oscarcc:你之後有用phenol/chloroform 嗎? 05/01 02:12
13F：→ oscarcc:記得離心後不要吸到下層的有機層，祝順利 05/01 02:13