作者ben00691206 (Ben)
看板Biotech
標題[求救] 關於western blot transfer的問題
時間Sat Mar 30 15:59:54 2013
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
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請問一下
現在有在做western blot
最終顯影的結果會有一片疑似泡泡的東西(但感覺不太像)
而且常常發生
如下網址↓↓↓↓
http://ppt.cc/JzU_
而我認為是transfer的問題
因為每次transfer完後用Ponceau S染色就會看到那一片
奇怪的是
實驗室的學姊她做都不會發生這種事情
所有儀器、試劑都是用一樣的東西
難道是我本身的手法有問題嗎?
transfer條件為(溼式, 400 mA, 1小時)
拜託各位高手
我已經困擾很久了
謝謝
剛剛transfer完染完Ponceau S又悲劇了→
http://ppt.cc/0nN0
我確定membrane和gel絕對沒有氣泡
我有多加一片海綿夾緊了還是這個樣子
不知道這是怎麼回事
唉~
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.63.180
1F：→ skybreeze:感覺是有東西擋道顯影或者是transfer 03/30 17:02
2F：推 chench0710:membrane與gel之間的氣泡有趕乾淨嗎?? 03/30 17:55
3F：推 yoke12071015:像氣泡 03/30 18:18
4F：→ a90648:transfer氣泡沒趕乾淨，ECL上不均勻都有可能 03/30 18:19
5F：→ mesenchymal:照你描述應該就是transfer時gel跟menbrane中間有氣泡 03/30 18:36
6F：→ alulu:看起來不像泡泡 海綿用很久了嗎? 多加一片 這樣會夾緊一點 03/31 01:35
7F：推 LUSRICH:應該是那個位置有一大團protein，反而起了blocking之效 03/31 03:00
8F：→ LUSRICH:大大你若對照一下你的CBR圖(如果有)可能可以看出線索 03/31 03:01
9F：→ LUSRICH:沒有做CBR的話membrane照完再泡CBR染也是可以~ 03/31 03:02
10F：→ blence:都已經染了Ponceau S了還CBR 03/31 03:18
我確定membrane和gel之間的氣泡有趕乾淨，我有在猜想是不是將圖畫紙放在membrane上
後又產生氣泡，但是我無法看到氣泡(我還是有做趕氣泡的動作)，請問這該如何改善?
小弟我本來認為是membrane有沾到什麼東西導致那一個區域無法transfer至membrane上。
to alulu:海綿用很久了，我會照你方法再試試
謝謝各位
※ 編輯: ben00691206 來自: 122.117.13.40 (03/31 08:41)
※ 編輯: ben00691206 來自: 122.117.13.40 (03/31 08:42)
※ 編輯: ben00691206 來自: 122.117.13.40 (03/31 08:44)
11F：推 skybreeze:放上圖畫紙後 我們前會用尺或者小滾輪來回滾 去除氣泡 03/31 16:36
※ 編輯: ben00691206 來自: 140.128.63.180 (03/31 20:53)
12F：→ iceking:transfer溫度呢? buffer濃度呢? buffer有均勻嗎? 04/01 13:31
13F：→ iceking:建議妳跟著學姊從頭到尾做一遍看看,哪些地方手法不同? 04/01 13:32
14F：→ raiyu:建議直接求學姊看你作 會比你看學姊作來得容易抓錯 04/01 20:18
15F：推 captdavince:想借問一下..我們的圖畫紙用久就很容易卡泡泡.大家也 04/01 23:05
16F：→ captdavince:是這樣嗎?會大概重複用幾次呢? 04/01 23:05
17F：推 iceking:圖畫紙我沒有在reuse的~ 04/02 12:05
18F：→ usual:1.membrane染染看是不是真的有一團，如果沒有 04/02 17:17
19F：→ usual:2.可能是加ECL時membrane上有泡泡，可以吸乾membrane再加 04/02 17:19
20F：推 puec2:就是泡泡沒趕乾淨阿 如果你說你很確定沒氣泡 我想你要 04/04 19:40
21F：→ puec2:改變你確定的方式 04/04 19:40
22F：推 greendeer:你可以拿個塑膠管(吸管之類的)，滾壓在膠上，這樣很有效 04/06 13:58
23F：推 oldtain:請問原波一個基本但有點蠢的問題 你趕氣泡是泡在TRANSFER 04/09 01:15
24F：→ oldtain:buffer裡面趕 還是放在空氣裡面貼上濾紙之後趕?? 04/09 01:16
25F：推 michealking:membrane戳到也會這樣 04/12 15:40
26F：推 keeny:我了解你的痛,我8年助理&PHD跑了近千片膠, 這應該是transfer 04/20 13:05
27F：→ keeny:問題,我建議fully pre-soak海綿和filter paper杜絕氣泡 加油 04/20 13:07