作者ben00691206 (Ben)
看板Biotech
标题[求救] 关於western blot transfer的问题
时间Sat Mar 30 15:59:54 2013
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章----
请问一下
现在有在做western blot
最终显影的结果会有一片疑似泡泡的东西(但感觉不太像)
而且常常发生
如下网址↓↓↓↓
http://ppt.cc/JzU_
而我认为是transfer的问题
因为每次transfer完後用Ponceau S染色就会看到那一片
奇怪的是
实验室的学姊她做都不会发生这种事情
所有仪器、试剂都是用一样的东西
难道是我本身的手法有问题吗?
transfer条件为(湿式, 400 mA, 1小时)
拜托各位高手
我已经困扰很久了
谢谢
刚刚transfer完染完Ponceau S又悲剧了→
http://ppt.cc/0nN0
我确定membrane和gel绝对没有气泡
我有多加一片海绵夹紧了还是这个样子
不知道这是怎麽回事
唉~
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.63.180
1F：→ skybreeze:感觉是有东西挡道显影或者是transfer 03/30 17:02
2F：推 chench0710:membrane与gel之间的气泡有赶乾净吗?? 03/30 17:55
3F：推 yoke12071015:像气泡 03/30 18:18
4F：→ a90648:transfer气泡没赶乾净，ECL上不均匀都有可能 03/30 18:19
5F：→ mesenchymal:照你描述应该就是transfer时gel跟menbrane中间有气泡 03/30 18:36
6F：→ alulu:看起来不像泡泡 海绵用很久了吗? 多加一片 这样会夹紧一点 03/31 01:35
7F：推 LUSRICH:应该是那个位置有一大团protein，反而起了blocking之效 03/31 03:00
8F：→ LUSRICH:大大你若对照一下你的CBR图(如果有)可能可以看出线索 03/31 03:01
9F：→ LUSRICH:没有做CBR的话membrane照完再泡CBR染也是可以~ 03/31 03:02
10F：→ blence:都已经染了Ponceau S了还CBR 03/31 03:18
我确定membrane和gel之间的气泡有赶乾净，我有在猜想是不是将图画纸放在membrane上
後又产生气泡，但是我无法看到气泡(我还是有做赶气泡的动作)，请问这该如何改善?
小弟我本来认为是membrane有沾到什麽东西导致那一个区域无法transfer至membrane上。
to alulu:海绵用很久了，我会照你方法再试试
谢谢各位
※ 编辑: ben00691206 来自: 122.117.13.40 (03/31 08:41)
※ 编辑: ben00691206 来自: 122.117.13.40 (03/31 08:42)
※ 编辑: ben00691206 来自: 122.117.13.40 (03/31 08:44)
11F：推 skybreeze:放上图画纸後 我们前会用尺或者小滚轮来回滚 去除气泡 03/31 16:36
※ 编辑: ben00691206 来自: 140.128.63.180 (03/31 20:53)
12F：→ iceking:transfer温度呢? buffer浓度呢? buffer有均匀吗? 04/01 13:31
13F：→ iceking:建议你跟着学姊从头到尾做一遍看看,哪些地方手法不同? 04/01 13:32
14F：→ raiyu:建议直接求学姊看你作 会比你看学姊作来得容易抓错 04/01 20:18
15F：推 captdavince:想借问一下..我们的图画纸用久就很容易卡泡泡.大家也 04/01 23:05
16F：→ captdavince:是这样吗?会大概重复用几次呢? 04/01 23:05
17F：推 iceking:图画纸我没有在reuse的~ 04/02 12:05
18F：→ usual:1.membrane染染看是不是真的有一团，如果没有 04/02 17:17
19F：→ usual:2.可能是加ECL时membrane上有泡泡，可以吸乾membrane再加 04/02 17:19
20F：推 puec2:就是泡泡没赶乾净阿 如果你说你很确定没气泡 我想你要 04/04 19:40
21F：→ puec2:改变你确定的方式 04/04 19:40
22F：推 greendeer:你可以拿个塑胶管(吸管之类的)，滚压在胶上，这样很有效 04/06 13:58
23F：推 oldtain:请问原波一个基本但有点蠢的问题 你赶气泡是泡在TRANSFER 04/09 01:15
24F：→ oldtain:buffer里面赶 还是放在空气里面贴上滤纸之後赶?? 04/09 01:16
25F：推 michealking:membrane戳到也会这样 04/12 15:40
26F：推 keeny:我了解你的痛,我8年助理&PHD跑了近千片胶, 这应该是transfer 04/20 13:05
27F：→ keeny:问题,我建议fully pre-soak海绵和filter paper杜绝气泡 加油 04/20 13:07