作者adamada (soso)
看板Biotech
標題[求救] PCR無法放大片段
時間Thu Mar 21 22:06:54 2013
手上有一對primer
如果是用Plasmid當template的話
這對primer是可以使用
但如果把plasmid放大的產物經由Gel-extract後
拿來再次放大
卻無法有產物!!!而只有Smear.....
請問有什麼方法可以解決嗎??
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◆ From: 134.76.0.211
1F：推 qiet:template放多少啊...會不會濃度過高 03/21 22:29
2F：→ xxtomnyxx:GelEx 是否有超過一條的 band? PCR 的詳細條件？ 03/21 22:52
3F：→ xxtomnyxx:還有你用什麼溶液來回溶 GelEx 的 DNA？ 03/21 22:52
4F：→ BGG:濃度太高是會p不出來的，大概5-10ng 就行了 03/21 23:55
5F：→ adamada:X我是用水回溶的！至於pcr條件沒有變，只有template不同！ 03/22 06:26
6F：→ adamada:產物只有single band!其實其他對primer都沒問題！ 03/22 06:27
7F：→ adamada:我放50ng!!我會向下修！但我plasmid用200ng也有阿！Orz 03/22 06:29
8F：推 qiet:都太高了吧...plasmid用<1ng都沒問題, 用PCR product當 03/22 11:31
9F：→ qiet:template得要更低, 03/22 11:31
10F：→ JanChang:用nested-PCR試試看，有時PCR產物本身兩端primer黏合的部 03/22 16:13
11F：→ JanChang:份會放大不完全，用它們當templates可能就會產生smear不 03/22 16:14
12F：→ JanChang:盡理想的結果。 03/22 16:14
13F：推 supray:純化過的plasmid 10~100pg就夠了 03/23 14:43
14F：推 yawai:P過的產物最好不要用原來的primer重新P喔 最好用nested-PCR 03/26 13:58
15F：→ yawai:這樣polymerase在template上才有立足點 03/26 13:59