作者adamada (soso)
看板Biotech
标题[求救] PCR无法放大片段
时间Thu Mar 21 22:06:54 2013
手上有一对primer
如果是用Plasmid当template的话
这对primer是可以使用
但如果把plasmid放大的产物经由Gel-extract後
拿来再次放大
却无法有产物!!!而只有Smear.....
请问有什麽方法可以解决吗??
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 134.76.0.211
1F：推 qiet:template放多少啊...会不会浓度过高 03/21 22:29
2F：→ xxtomnyxx:GelEx 是否有超过一条的 band? PCR 的详细条件？ 03/21 22:52
3F：→ xxtomnyxx:还有你用什麽溶液来回溶 GelEx 的 DNA？ 03/21 22:52
4F：→ BGG:浓度太高是会p不出来的，大概5-10ng 就行了 03/21 23:55
5F：→ adamada:X我是用水回溶的！至於pcr条件没有变，只有template不同！ 03/22 06:26
6F：→ adamada:产物只有single band!其实其他对primer都没问题！ 03/22 06:27
7F：→ adamada:我放50ng!!我会向下修！但我plasmid用200ng也有阿！Orz 03/22 06:29
8F：推 qiet:都太高了吧...plasmid用<1ng都没问题, 用PCR product当 03/22 11:31
9F：→ qiet:template得要更低, 03/22 11:31
10F：→ JanChang:用nested-PCR试试看，有时PCR产物本身两端primer黏合的部 03/22 16:13
11F：→ JanChang:份会放大不完全，用它们当templates可能就会产生smear不 03/22 16:14
12F：→ JanChang:尽理想的结果。 03/22 16:14
13F：推 supray:纯化过的plasmid 10~100pg就够了 03/23 14:43
14F：推 yawai:P过的产物最好不要用原来的primer重新P喔 最好用nested-PCR 03/26 13:58
15F：→ yawai:这样polymerase在template上才有立足点 03/26 13:59