※ 引述《mysterywind (mysterywind)》之銘言： : ※ 引述《josephkokomo (...)》之銘言： : : 你是指用Baculovirus system表達你要的蛋白嗎 : : 另外假設是cytosolic protein : : 1. Cre那步驟之後 你有確定你的DNA被insert成功嗎 : : 2. virus 有測過 titer嗎 或是你確定加入virus有成功感染你的cell (可以從生長曲線推測) : : 3. virus infection 之後 等多久作SDS-PAGE : : Invitrogen(life)的使用手冊有完善的教學 : 1. 我有跑過PCR確定基因有進去 : 2. 我們沒有測titer 目前是打算先求有表現 再調整 : 也怕titer太低 測不到 生長曲線怎麼做? : 我是依照 CPE的情況 來判別是否成功感染 : 3. 基本上是3天左右收細胞 跑SDS WB : 因為同樣的方法 其他人的基因有表現出來 : 我也有做過別人的基因 有表現 : 就是不知道 為何就是自己的表現不出 ?? : 想說還有哪些調整比較好!! 我生產蛋白是用P2的病毒 SF-9 和 Hi5都做 使用Bac to Bac的系統 我有一個疑問 同個系統 有的表現多 有的疑似沒表現 這跟目標蛋白質的種類有差嗎? 像是 膜蛋白 糖蛋白 封套蛋白...之類 --

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