※ 引述《mysterywind (mysterywind)》之铭言： : ※ 引述《josephkokomo (...)》之铭言： : : 你是指用Baculovirus system表达你要的蛋白吗 : : 另外假设是cytosolic protein : : 1. Cre那步骤之後 你有确定你的DNA被insert成功吗 : : 2. virus 有测过 titer吗 或是你确定加入virus有成功感染你的cell (可以从生长曲线推测) : : 3. virus infection 之後 等多久作SDS-PAGE : : Invitrogen(life)的使用手册有完善的教学 : 1. 我有跑过PCR确定基因有进去 : 2. 我们没有测titer 目前是打算先求有表现 再调整 : 也怕titer太低 测不到 生长曲线怎麽做? : 我是依照 CPE的情况 来判别是否成功感染 : 3. 基本上是3天左右收细胞 跑SDS WB : 因为同样的方法 其他人的基因有表现出来 : 我也有做过别人的基因 有表现 : 就是不知道 为何就是自己的表现不出 ?? : 想说还有哪些调整比较好!! 我生产蛋白是用P2的病毒 SF-9 和 Hi5都做 使用Bac to Bac的系统 我有一个疑问 同个系统 有的表现多 有的疑似没表现 这跟目标蛋白质的种类有差吗? 像是 膜蛋白 糖蛋白 封套蛋白...之类 --

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