作者sss79818 (豪洨哥)
看板Biotech
標題[求救] MTT assay
時間Thu Mar 14 12:26:33 2013
不好意思，上來請教一下
目前我做的實驗是以光動力治療產生自由基來殺死癌細胞(hela cell)
seed在96 well裡，每格5000個，養兩天後加藥
實驗組別有
1.medium裡加入亞甲基藍，放回培養箱2hr後拿出來打雷射4分鐘(光動力治療組)
2.一樣是加入亞甲基藍，但是不打雷射(測單純藥物暗毒性組)
3.什麼都不做(control group)
目前我是在下藥後的隔一天才拿出來做MTT assay
但做了好幾次結果都跳動很大不如預期
我在想隔一天才做MTT會不會隔太久，
可能光動力治療後死掉的細胞也沒那麼多，隔天就又長滿了
但又怕太早做的話，細胞還沒死透，這樣測出來會不準
據我所知，光動力治療會induce cell apoptosis
而MTT是靠測量粒線體活性來反映細胞活性
請問若細胞已經開始aptosis的話，粒線體會馬上失去活性嗎?
還是要等到later stage的時候才會呢?
查了好幾篇相關paper關於這方面的細節都沒有詳述
學長姐們做的實驗方向也跟我不太一樣，愛莫能助
所以只好上來求救了
謝謝幫忙~"~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.182.185
1F：推 tsubasawolfy:沒先做雷射強度梯度測試 還有positive control? 03/14 12:59
2F：→ Ianthegood:樓上中肯 有相關的reference嗎? 03/14 13:16
3F：→ untilnow:ap"op"tosis? 03/14 13:37
4F：→ blence:你可以查一下一般radiation之後，大概多久才看到cell death 03/14 14:13
5F：→ blence:再去回答隔一天就加MTT會不會太短,再者5000cell放兩天才處 03/14 14:16
6F：→ blence:理,應該可以在處理當下看到細胞在96well就差不多要擠滿了 03/14 14:17
7F：→ blence:這種滿度下control組還要多放一天才做MTT,顯然不太好 03/14 14:21
8F：推 CD133:blence正解，hela長得快的跟細菌一樣，今天seeding明天就要 03/14 14:48
9F：→ CD133:做了，另外，96 well最外圍的well不要用，medium體積會變動 03/14 14:50
10F：推 apple23418:有先算hela的double in time嗎？ 測MTS前不是都要先 03/14 18:25
11F：→ apple23418:測細胞的生長曲線嗎？看他多久二分裂,加藥後光動力治 03/14 18:25
12F：→ apple23418:療可能三小時六小時九小時測一次這樣！ 03/14 18:25
13F：→ apple23418:一點小小的意見不知這對不對！請見諒 03/14 18:25
14F：→ sss79818:感謝各位的回答 我先把加藥時間提前看看 seeding後放兩天 03/15 22:50
15F：→ sss79818:真的太長了 03/15 22:51
※ 編輯: sss79818 來自: 112.104.153.17 (03/15 22:51)