作者sss79818 (豪洨哥)
看板Biotech
标题[求救] MTT assay
时间Thu Mar 14 12:26:33 2013
不好意思，上来请教一下
目前我做的实验是以光动力治疗产生自由基来杀死癌细胞(hela cell)
seed在96 well里，每格5000个，养两天後加药
实验组别有
1.medium里加入亚甲基蓝，放回培养箱2hr後拿出来打雷射4分钟(光动力治疗组)
2.一样是加入亚甲基蓝，但是不打雷射(测单纯药物暗毒性组)
3.什麽都不做(control group)
目前我是在下药後的隔一天才拿出来做MTT assay
但做了好几次结果都跳动很大不如预期
我在想隔一天才做MTT会不会隔太久，
可能光动力治疗後死掉的细胞也没那麽多，隔天就又长满了
但又怕太早做的话，细胞还没死透，这样测出来会不准
据我所知，光动力治疗会induce cell apoptosis
而MTT是靠测量粒线体活性来反映细胞活性
请问若细胞已经开始aptosis的话，粒线体会马上失去活性吗?
还是要等到later stage的时候才会呢?
查了好几篇相关paper关於这方面的细节都没有详述
学长姐们做的实验方向也跟我不太一样，爱莫能助
所以只好上来求救了
谢谢帮忙~"~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.182.185
1F：推 tsubasawolfy:没先做雷射强度梯度测试 还有positive control? 03/14 12:59
2F：→ Ianthegood:楼上中肯 有相关的reference吗? 03/14 13:16
3F：→ untilnow:ap"op"tosis? 03/14 13:37
4F：→ blence:你可以查一下一般radiation之後，大概多久才看到cell death 03/14 14:13
5F：→ blence:再去回答隔一天就加MTT会不会太短,再者5000cell放两天才处 03/14 14:16
6F：→ blence:理,应该可以在处理当下看到细胞在96well就差不多要挤满了 03/14 14:17
7F：→ blence:这种满度下control组还要多放一天才做MTT,显然不太好 03/14 14:21
8F：推 CD133:blence正解，hela长得快的跟细菌一样，今天seeding明天就要 03/14 14:48
9F：→ CD133:做了，另外，96 well最外围的well不要用，medium体积会变动 03/14 14:50
10F：推 apple23418:有先算hela的double in time吗？ 测MTS前不是都要先 03/14 18:25
11F：→ apple23418:测细胞的生长曲线吗？看他多久二分裂,加药後光动力治 03/14 18:25
12F：→ apple23418:疗可能三小时六小时九小时测一次这样！ 03/14 18:25
13F：→ apple23418:一点小小的意见不知这对不对！请见谅 03/14 18:25
14F：→ sss79818:感谢各位的回答 我先把加药时间提前看看 seeding後放两天 03/15 22:50
15F：→ sss79818:真的太长了 03/15 22:51
※ 编辑: sss79818 来自: 112.104.153.17 (03/15 22:51)