作者sylvialalala (sylvia)
看板Biotech
標題[求救] cloning用low copy的vector
時間Wed Feb 27 21:43:07 2013
因為要clone的東西比較大
所以選用low copy的fosmid作為vector
用recombination的方式insert進去
insert:17kb, vector:8kb
是用一般的competent cell tansform的
但是我一直無法成功
沾菌pcr有目標產物(3段不同地方都有）
但是要養liquid就一直無法成功,有一次養了兩天有菌了
但是抽出來後未切跑膠有東西，切過之後變成smear了....
所以cloning一直失敗
想請問有用過low copy做cloning的朋友
有什麼小訣竅或是要注意,跟一般cloning不一樣的地方呢
我卡了兩個月,希望可以獲得一些建議......
謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 118.166.195.133
1F：推 joseph103331:沒做過 不過有點好奇你為什麼要切 預期切成幾段? 03/01 00:13
2F：→ joseph103331:用low copy抽出來的量會不會比較少? 03/01 00:13
3F：→ sylvialalala:會比較少,所以要用比較麻煩的方式抽,另外切是因為要y 03/01 21:24
4F：→ sylvialalala:確認是目標產物～～（畢竟是cloning麻～） 03/01 21:24