作者sylvialalala (sylvia)
看板Biotech
标题[求救] cloning用low copy的vector
时间Wed Feb 27 21:43:07 2013
因为要clone的东西比较大
所以选用low copy的fosmid作为vector
用recombination的方式insert进去
insert:17kb, vector:8kb
是用一般的competent cell tansform的
但是我一直无法成功
沾菌pcr有目标产物(3段不同地方都有）
但是要养liquid就一直无法成功,有一次养了两天有菌了
但是抽出来後未切跑胶有东西，切过之後变成smear了....
所以cloning一直失败
想请问有用过low copy做cloning的朋友
有什麽小诀窍或是要注意,跟一般cloning不一样的地方呢
我卡了两个月,希望可以获得一些建议......
谢谢
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◆ From: 118.166.195.133
1F：推 joseph103331:没做过 不过有点好奇你为什麽要切 预期切成几段? 03/01 00:13
2F：→ joseph103331:用low copy抽出来的量会不会比较少? 03/01 00:13
3F：→ sylvialalala:会比较少,所以要用比较麻烦的方式抽,另外切是因为要y 03/01 21:24
4F：→ sylvialalala:确认是目标产物～～（毕竟是cloning麻～） 03/01 21:24