作者shiningspark (阿冠)
看板Biotech
標題[求救] E.coli electroporation
時間Thu Jan 31 04:49:52 2013
請問各位
electroporation如何避免電爆呢?
最近每電必爆
前陣子成功率還蠻高的，快氣死人了
實驗的條件為1900 V
約40 ul competent cell
加10 ul ligated plasmid
外觀看起來沒有氣泡，水滴也有擦乾
plasmid量太多會有影響嗎?
或是plasmid體積太大影響電阻?
cuvette也有放冰上預冷
但預冷是要把整根金屬部分都埋進去呢?
或是大概菌液會接觸到的部分就足夠?
還有其他可能失敗的原因嗎?
實在是電到很挫折啊...
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.99.150
1F：→ shiningspark:另外請教，爆過的cuvette還可以reuse嗎?? 01/31 05:32
2F：→ skybreeze:之前做是整個金屬部分都放下去預冷 01/31 08:34
3F：→ skybreeze:是否有其他的cuvette可以試試看!? 01/31 08:34
4F：→ cloneting:cuvette要用超音波洗過，DNA太濃 鹽濃度過高必爆 01/31 11:59
5F：→ shiningspark:好像是喔，同一個vector作self-ligation，不加insert 01/31 15:03
6F：→ shiningspark:改補ddH20，濃度約減半，就成功了(雖然還是失敗一次) 01/31 15:05
7F：→ shiningspark:測了260/230=1.5，請問這sample鹽濃度是可接受的嗎? 01/31 16:12
8F：→ licat:爆過還是可以再用 我以前都用到外表龜裂 或是只加水也會爆時 02/02 19:09
9F：→ licat:才會丟掉 另外你ligation product加越多 整體鹽濃度越高 02/02 19:11
10F：→ licat:就越容易爆管 如果ligation有成功 其實你加2-3 ul就可以了 02/02 19:11
11F：→ licat:但你ligation的條件我不知道 所以你得自己抓適合的體積 02/02 19:15
12F：→ licat:加到10 ul實在太多就是... 02/02 19:15
13F：→ shiningspark:感謝大家的回答喔，不過還有一點不太明白，DNA太濃為 02/03 05:23
14F：→ shiningspark:何也會造成arcing呢? 因為DNA帶負電嗎? 02/03 05:26
15F：→ licat:我不清楚DNA的帶電是否會影響 但當你把DNA濃度放大時 02/03 10:49
16F：→ licat:溶液中) 畢竟純化的DNA溶液中不會只有"DNA" 02/03 10:51