作者shiningspark (阿冠)
看板Biotech
标题[求救] E.coli electroporation
时间Thu Jan 31 04:49:52 2013
请问各位
electroporation如何避免电爆呢?
最近每电必爆
前阵子成功率还蛮高的，快气死人了
实验的条件为1900 V
约40 ul competent cell
加10 ul ligated plasmid
外观看起来没有气泡，水滴也有擦乾
plasmid量太多会有影响吗?
或是plasmid体积太大影响电阻?
cuvette也有放冰上预冷
但预冷是要把整根金属部分都埋进去呢?
或是大概菌液会接触到的部分就足够?
还有其他可能失败的原因吗?
实在是电到很挫折啊...
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.99.150
1F：→ shiningspark:另外请教，爆过的cuvette还可以reuse吗?? 01/31 05:32
2F：→ skybreeze:之前做是整个金属部分都放下去预冷 01/31 08:34
3F：→ skybreeze:是否有其他的cuvette可以试试看!? 01/31 08:34
4F：→ cloneting:cuvette要用超音波洗过，DNA太浓 盐浓度过高必爆 01/31 11:59
5F：→ shiningspark:好像是喔，同一个vector作self-ligation，不加insert 01/31 15:03
6F：→ shiningspark:改补ddH20，浓度约减半，就成功了(虽然还是失败一次) 01/31 15:05
7F：→ shiningspark:测了260/230=1.5，请问这sample盐浓度是可接受的吗? 01/31 16:12
8F：→ licat:爆过还是可以再用 我以前都用到外表龟裂 或是只加水也会爆时 02/02 19:09
9F：→ licat:才会丢掉 另外你ligation product加越多 整体盐浓度越高 02/02 19:11
10F：→ licat:就越容易爆管 如果ligation有成功 其实你加2-3 ul就可以了 02/02 19:11
11F：→ licat:但你ligation的条件我不知道 所以你得自己抓适合的体积 02/02 19:15
12F：→ licat:加到10 ul实在太多就是... 02/02 19:15
13F：→ shiningspark:感谢大家的回答喔，不过还有一点不太明白，DNA太浓为 02/03 05:23
14F：→ shiningspark:何也会造成arcing呢? 因为DNA带负电吗? 02/03 05:26
15F：→ licat:我不清楚DNA的带电是否会影响 但当你把DNA浓度放大时 02/03 10:49
16F：→ licat:溶液中) 毕竟纯化的DNA溶液中不会只有"DNA" 02/03 10:51