作者saiwilly (牛角小瑋)
看板Biotech
標題[求救] Transwell assay
時間Sun Jan 27 01:50:40 2013
染色階段順序為下
Methanol 10 min (fix cell)
↓
浸水 5 min (中止methanol反應)
↓
用棉花棒除去transwell上層gel
↓
LiuA 1 min
↓
LiuB 1.5 min
↓
大量清水沖洗
目前碰到問題就是....
我浸完methanol後~細胞掉超級多下去
導致染完色根本看不出差別
我做的是A549 分別加藥和不加藥來看invasion能力的變化
那Control浸完methanol後掉的細胞超多~我認為代表是爬過去的較多
可是methanol根本無法固定住細胞~這樣染色根本毫無意義
請各位大師救救小弟~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 120.126.51.37
1F：推 tsubasawolfy:methanol fix在RT情況下反應強烈容易掉細胞 01/27 10:34
2F：→ tsubasawolfy:要用methanol fix的話先降溫到-20度C再加 反應也在-2 01/27 10:35
3F：→ tsubasawolfy:0 不然你就改用paraformaldehyde在RT下反應 01/27 10:36
4F：→ tsubasawolfy:另外methanol會把membrane lipid完全去除 如果你之後 01/27 10:37
5F：→ tsubasawolfy:要看細胞膜上的蛋白就不要用 01/27 10:37
6F：→ raiyu:我前陣子也卡關在染色後來改成10%formadehyde直接fix 15min 01/27 14:57
7F：→ raiyu: 更正3.7% 01/27 15:04