作者saiwilly (牛角小玮)
看板Biotech
标题[求救] Transwell assay
时间Sun Jan 27 01:50:40 2013
染色阶段顺序为下
Methanol 10 min (fix cell)
↓
浸水 5 min (中止methanol反应)
↓
用棉花棒除去transwell上层gel
↓
LiuA 1 min
↓
LiuB 1.5 min
↓
大量清水冲洗
目前碰到问题就是....
我浸完methanol後~细胞掉超级多下去
导致染完色根本看不出差别
我做的是A549 分别加药和不加药来看invasion能力的变化
那Control浸完methanol後掉的细胞超多~我认为代表是爬过去的较多
可是methanol根本无法固定住细胞~这样染色根本毫无意义
请各位大师救救小弟~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 120.126.51.37
1F：推 tsubasawolfy:methanol fix在RT情况下反应强烈容易掉细胞 01/27 10:34
2F：→ tsubasawolfy:要用methanol fix的话先降温到-20度C再加 反应也在-2 01/27 10:35
3F：→ tsubasawolfy:0 不然你就改用paraformaldehyde在RT下反应 01/27 10:36
4F：→ tsubasawolfy:另外methanol会把membrane lipid完全去除 如果你之後 01/27 10:37
5F：→ tsubasawolfy:要看细胞膜上的蛋白就不要用 01/27 10:37
6F：→ raiyu:我前阵子也卡关在染色後来改成10%formadehyde直接fix 15min 01/27 14:57
7F：→ raiyu: 更正3.7% 01/27 15:04