作者Peetu (さとし)
看板Biotech
標題Fw: [實驗]HPLC mobile phase的peak
時間Tue Jan 22 23:58:50 2013
※ [本文轉錄自 Chemistry 看板 #1G_hOROC ]
作者: Peetu (さとし) 看板: Chemistry
標題: [實驗]HPLC mobile phase的peak
時間: Tue Jan 22 23:53:57 2013
最近在使用HPLC分析高分子聚合物(polypeptide)
第一次使用HPLC，想請教一個問題
我的column是size exclusion chromatography
mobile phase是PBS
detector是用RI
在進樣前已經有將base line歸零穩定了
然而我的sample進樣後，RT在10分、15分與18分時都會出現peak
打一針空針(only mobile phase)，peak只在15、18分鐘出現
可想而知我的sample應該是在10分鐘出現的那個peak
我的問題是，為什麼15、18分鐘時，會出現訊號呢?
其他人好像都說因為mobile phase本身也會有訊號
但我在進樣前已經將訊號穩定，訊號呈現水平，mobile phase是一樣的
沒道理再打一針mobile phase就會在15、18分鐘出現訊號
打一針純水也會出現一樣的訊號....
但是換了mobile phase後，訊號就不同了
想請問一下，這是什麼原因呢??
謝謝
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◆ From: 140.138.155.68
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※ 轉錄者: Peetu (140.138.155.68), 時間: 01/22/2013 23:58:50
1F：→ iceking:請問你有打sample buffer嗎? 01/23 11:57
sample buffer的是指溶sample的buffer嗎? 我用的是水，有打過了，跟打MP是一樣的結
果@@
※ 編輯: Peetu 來自: 140.138.155.68 (01/25 00:48)
2F：推 simonmiho:如果你打水跟打MP圖是一樣的話..那15/18分鐘的東西 01/25 04:29
3F：→ simonmiho:就是汙染..因為水跟PBS差在PBS有鹽類..理論上打水的話 01/25 04:30
4F：→ simonmiho:應該會有負吸收的peak (因為用PBS當MP的話..打一個沒有) 01/25 04:31
5F：→ simonmiho:鹽的東西..RI detector認為介質反射有差..應該有peak 01/25 04:32
6F：→ simonmiho:除非你LC軟體有設定把negative peak自動轉成一般的peak 01/25 04:33
7F：→ iceking:把管線,取樣針頭好好清潔一番試試. 01/25 11:44