作者Peetu (さとし)
看板Biotech
标题Fw: [实验]HPLC mobile phase的peak
时间Tue Jan 22 23:58:50 2013
※ [本文转录自 Chemistry 看板 #1G_hOROC ]
作者: Peetu (さとし) 看板: Chemistry
标题: [实验]HPLC mobile phase的peak
时间: Tue Jan 22 23:53:57 2013
最近在使用HPLC分析高分子聚合物(polypeptide)
第一次使用HPLC，想请教一个问题
我的column是size exclusion chromatography
mobile phase是PBS
detector是用RI
在进样前已经有将base line归零稳定了
然而我的sample进样後，RT在10分、15分与18分时都会出现peak
打一针空针(only mobile phase)，peak只在15、18分钟出现
可想而知我的sample应该是在10分钟出现的那个peak
我的问题是，为什麽15、18分钟时，会出现讯号呢?
其他人好像都说因为mobile phase本身也会有讯号
但我在进样前已经将讯号稳定，讯号呈现水平，mobile phase是一样的
没道理再打一针mobile phase就会在15、18分钟出现讯号
打一针纯水也会出现一样的讯号....
但是换了mobile phase後，讯号就不同了
想请问一下，这是什麽原因呢??
谢谢
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※ 转录者: Peetu (140.138.155.68), 时间: 01/22/2013 23:58:50
1F：→ iceking:请问你有打sample buffer吗? 01/23 11:57
sample buffer的是指溶sample的buffer吗? 我用的是水，有打过了，跟打MP是一样的结
果@@
※ 编辑: Peetu 来自: 140.138.155.68 (01/25 00:48)
2F：推 simonmiho:如果你打水跟打MP图是一样的话..那15/18分钟的东西 01/25 04:29
3F：→ simonmiho:就是污染..因为水跟PBS差在PBS有盐类..理论上打水的话 01/25 04:30
4F：→ simonmiho:应该会有负吸收的peak (因为用PBS当MP的话..打一个没有) 01/25 04:31
5F：→ simonmiho:盐的东西..RI detector认为介质反射有差..应该有peak 01/25 04:32
6F：→ simonmiho:除非你LC软体有设定把negative peak自动转成一般的peak 01/25 04:33
7F：→ iceking:把管线,取样针头好好清洁一番试试. 01/25 11:44