作者Daphnia (Daphnia)
看板Biotech
標題[求救] 大分子量的蛋白做westen blot的問題
時間Wed Jan 16 22:41:48 2013
做大分子量蛋白的westen blot(MUC2 ABcam的ab11179吧,抗體說明書是寫認600 kda)
該用幾%的膠去跑阿???我跑出來抗體認出來的位置怪怪在170 kDa,我用的marker最大
也只到170 kDa(不知是不是抗體專一性不好)還是我的目標根本沒壓到卡在很上面的地方
有沒有做過那麼大分子量的神人指導我一下
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 121.254.66.200
1F：推 vancent:做IF啦~做什麼WB 01/16 23:42
2F：→ Daphnia:沒設備配合啊…實驗室沒這技術要重新建立有難度！ 01/17 00:12
3F：→ blence:可能有神人做過,但如果你有列出條件與秀data更好,說不定不 01/17 00:54
4F：→ blence:是%的問題,另外這支Ab clone有至少五家公司賣,有賣的都只有 01/17 00:56
5F：→ blence:放IHC,WB可能有挑戰性,還有abcam沒放圖,美金賣價還偏貴 01/17 00:57
6F：推 pichia:1樓..IF和WB可以看的事情不太一樣吧~ 01/17 03:38
7F：推 tsubasawolfy:600...如果是要定量的話我覺得改用flow會好一點 01/17 09:06
8F：→ tsubasawolfy:wb跑600用3%還可能卡在well上吧一.一 01/17 09:07
9F：推 REIDO:agarose如何？ 01/17 10:25
12F：→ Daphnia:最右邊有白色的兩條ＢＡＮＤ從上到下是170和130的marker 01/17 10:59
13F：→ Daphnia:ＷＢ真的可以跑那麼大分子量的蛋白嗎？？？ 01/17 11:00
15F：→ Daphnia:這網站感覺不錯！！感謝,我來研究看看說不定找出我的盲點 01/17 15:40
17F：→ puec2:你的abcam產品序號寫錯了吧 01/18 13:34
18F：推 kakaman:600KDa...慘痛的回憶 01/18 22:19
19F：推 kakaman:當然有人跑過這麼大的 就是有人成功 當初我老闆才會要我作 01/18 22:22
20F：→ kakaman:我用過3%以及4%~20%的膠很難跑... 01/18 22:24
21F：→ kakaman:transfer也是很大的問題...以前隔壁神人老奶奶作過破千的 01/18 22:26
22F：→ kakaman:他的gel是agarose,transfer的方式有點像南方墨點法... 01/18 22:27
23F：→ kakaman:實驗室若沒有相關的經驗...可能會遇到不少困難 01/18 22:28
24F：→ kakaman:不過要是妳成功了 可以跟大家分享一下心得嗎 01/18 22:29
25F：→ Daphnia:嘆～還在胡亂做測試……頭非常痛！ 01/20 23:26
26F：→ Daphnia:真的有可能做的出來嗎？？？我想準時畢業啦！！！ 01/20 23:28
27F：→ Daphnia:真的也我產品序號記錯了……是ab11197才對 01/20 23:30