作者Daphnia (Daphnia)
看板Biotech
标题[求救] 大分子量的蛋白做westen blot的问题
时间Wed Jan 16 22:41:48 2013
做大分子量蛋白的westen blot(MUC2 ABcam的ab11179吧,抗体说明书是写认600 kda)
该用几%的胶去跑阿???我跑出来抗体认出来的位置怪怪在170 kDa,我用的marker最大
也只到170 kDa(不知是不是抗体专一性不好)还是我的目标根本没压到卡在很上面的地方
有没有做过那麽大分子量的神人指导我一下
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◆ From: 121.254.66.200
1F：推 vancent:做IF啦~做什麽WB 01/16 23:42
2F：→ Daphnia:没设备配合啊…实验室没这技术要重新建立有难度！ 01/17 00:12
3F：→ blence:可能有神人做过,但如果你有列出条件与秀data更好,说不定不 01/17 00:54
4F：→ blence:是%的问题,另外这支Ab clone有至少五家公司卖,有卖的都只有 01/17 00:56
5F：→ blence:放IHC,WB可能有挑战性,还有abcam没放图,美金卖价还偏贵 01/17 00:57
6F：推 pichia:1楼..IF和WB可以看的事情不太一样吧~ 01/17 03:38
7F：推 tsubasawolfy:600...如果是要定量的话我觉得改用flow会好一点 01/17 09:06
8F：→ tsubasawolfy:wb跑600用3%还可能卡在well上吧一.一 01/17 09:07
9F：推 REIDO:agarose如何？ 01/17 10:25
12F：→ Daphnia:最右边有白色的两条ＢＡＮＤ从上到下是170和130的marker 01/17 10:59
13F：→ Daphnia:ＷＢ真的可以跑那麽大分子量的蛋白吗？？？ 01/17 11:00
15F：→ Daphnia:这网站感觉不错！！感谢,我来研究看看说不定找出我的盲点 01/17 15:40
17F：→ puec2:你的abcam产品序号写错了吧 01/18 13:34
18F：推 kakaman:600KDa...惨痛的回忆 01/18 22:19
19F：推 kakaman:当然有人跑过这麽大的 就是有人成功 当初我老板才会要我作 01/18 22:22
20F：→ kakaman:我用过3%以及4%~20%的胶很难跑... 01/18 22:24
21F：→ kakaman:transfer也是很大的问题...以前隔壁神人老奶奶作过破千的 01/18 22:26
22F：→ kakaman:他的gel是agarose,transfer的方式有点像南方墨点法... 01/18 22:27
23F：→ kakaman:实验室若没有相关的经验...可能会遇到不少困难 01/18 22:28
24F：→ kakaman:不过要是你成功了 可以跟大家分享一下心得吗 01/18 22:29
25F：→ Daphnia:叹～还在胡乱做测试……头非常痛！ 01/20 23:26
26F：→ Daphnia:真的有可能做的出来吗？？？我想准时毕业啦！！！ 01/20 23:28
27F：→ Daphnia:真的也我产品序号记错了……是ab11197才对 01/20 23:30