作者windwin (小均均)
看板Biotech
標題[求救] apoptosis 測法
時間Wed Jan 9 11:04:30 2013
各位版友好
目前我在測神經細胞的apoptosis
我用了
IMR32, N2A, dPC12
三種細胞去測
方法為annexin V /PI 去測
都只測到PI
annexin V 則毫無反應
請別間實驗室去測
確定annexin V是沒問題的
我是和有經驗但以前用不同細胞測的學姊一起測
所以操作上應該沒有問題
請問為什麼會有這樣的情況呢?
我現在想改用
H 33342 /PI 去測 (flow)
或單純用 H 33342 去測 (microscope)
想問後者要如何進行數量分析?
是一個一個數然後看有哪些產生apoptosis
還是直接算螢光強度就好了呢?
(我看paper都只說用microscope去測量)
謝謝大家
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◆ From: 140.112.79.11
1F：→ roy047:時間點有往前試過嗎? late apoptosis也會變成annexin V- 01/09 11:23
2F：→ roy047:第二點之前經驗是算apoptosis百分比 較好 強度可能不太準 01/09 11:24
3F：→ windwin:因為ANNEXIN v完全沒有，連一點反應也沒有... 01/09 11:44
4F：→ roy047:同時做個positive control看看? 也可能是染劑問題 01/09 12:00
5F：→ roy047:有確定Annexin V後面接的flurophore可被偵測到嗎? 01/09 12:01
6F：→ windwin:有請別實驗室的同學做過不同實驗，annexin V 沒問題 01/09 12:03
7F：→ roy047:如果都不是的話 可能就要換方法看看了 01/09 12:03
8F：→ roy047:還有想到一個 Annexin V染完後要馬上測 不然會消失 01/09 12:04
9F：→ roy047:不知是否這原因 01/09 12:04
10F：→ windwin:使用Cycloheximide做為positive control 01/09 12:06
11F：→ windwin:全程避光，因為有加pi所以無法馬上測 01/09 12:07
12F：→ windwin:非常感謝您喔~ 01/09 12:08
13F：推 roy047:ORZ 那只好建議先換方法看是否真是apoptosis了 祝順利 01/09 12:11
14F：→ roy047:抱歉這三種細胞都沒做過~無法幫上忙@@ 01/09 12:12
15F：推 qiet:是指positive ctrl也都只有PI+? 01/09 20:37
16F：→ windwin:是的!!! 01/09 22:36
17F：推 qiet:確定這個postive ctrl適用這些細胞嗎 濃度是否正確 01/09 22:40
18F：→ qiet:該不會都necrosis了 01/09 22:42
19F：→ skyofsilver:感覺是染劑問題或沒染上 印象中late apoptosis比較會 01/10 11:38
20F：→ skyofsilver:是annexin V+ PI+ 01/10 11:38