作者windwin (小均均)
看板Biotech
标题[求救] apoptosis 测法
时间Wed Jan 9 11:04:30 2013
各位版友好
目前我在测神经细胞的apoptosis
我用了
IMR32, N2A, dPC12
三种细胞去测
方法为annexin V /PI 去测
都只测到PI
annexin V 则毫无反应
请别间实验室去测
确定annexin V是没问题的
我是和有经验但以前用不同细胞测的学姊一起测
所以操作上应该没有问题
请问为什麽会有这样的情况呢?
我现在想改用
H 33342 /PI 去测 (flow)
或单纯用 H 33342 去测 (microscope)
想问後者要如何进行数量分析?
是一个一个数然後看有哪些产生apoptosis
还是直接算萤光强度就好了呢?
(我看paper都只说用microscope去测量)
谢谢大家
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.79.11
1F：→ roy047:时间点有往前试过吗? late apoptosis也会变成annexin V- 01/09 11:23
2F：→ roy047:第二点之前经验是算apoptosis百分比 较好 强度可能不太准 01/09 11:24
3F：→ windwin:因为ANNEXIN v完全没有，连一点反应也没有... 01/09 11:44
4F：→ roy047:同时做个positive control看看? 也可能是染剂问题 01/09 12:00
5F：→ roy047:有确定Annexin V後面接的flurophore可被侦测到吗? 01/09 12:01
6F：→ windwin:有请别实验室的同学做过不同实验，annexin V 没问题 01/09 12:03
7F：→ roy047:如果都不是的话 可能就要换方法看看了 01/09 12:03
8F：→ roy047:还有想到一个 Annexin V染完後要马上测 不然会消失 01/09 12:04
9F：→ roy047:不知是否这原因 01/09 12:04
10F：→ windwin:使用Cycloheximide做为positive control 01/09 12:06
11F：→ windwin:全程避光，因为有加pi所以无法马上测 01/09 12:07
12F：→ windwin:非常感谢您喔~ 01/09 12:08
13F：推 roy047:ORZ 那只好建议先换方法看是否真是apoptosis了 祝顺利 01/09 12:11
14F：→ roy047:抱歉这三种细胞都没做过~无法帮上忙@@ 01/09 12:12
15F：推 qiet:是指positive ctrl也都只有PI+? 01/09 20:37
16F：→ windwin:是的!!! 01/09 22:36
17F：推 qiet:确定这个postive ctrl适用这些细胞吗 浓度是否正确 01/09 22:40
18F：→ qiet:该不会都necrosis了 01/09 22:42
19F：→ skyofsilver:感觉是染剂问题或没染上 印象中late apoptosis比较会 01/10 11:38
20F：→ skyofsilver:是annexin V+ PI+ 01/10 11:38