作者nhxcyge (人生就像個不可逆反應)
看板Biotech
標題[求救] active caspase-6 偵測
時間Sat Jan 5 20:50:14 2013
各位版友好，
想請問一下有沒有人用過 cell signaling他們家的cleaved caspase-6 (#9761)
http://tinyurl.com/b76yf56，先前實驗發現我的蛋白質(可能是caspase-6的受質)，
有被切的現象，而大小也正好事caspase-6的切位。因此想直接壓cleaved caspase-6
的訊號。但在十幾kD的位子沒看到我預期的訊號，且backgroud頗髒。
我的實驗步驟如下：
1、實驗的sample (原濃度為1 ug/ul)利用蛋白質沉澱方式濃縮三倍(理論濃度為3 ug/ul)
2、每個lane loading 60 ug的蛋白質。
3、跑12%的gel。
4、Blocking with 3% BSA 1小時。
5、Cleaved caspase-6 (1:1000) O/N.
6、Anti-rabbit (1:2000) 1小時。
請問有什麼地方可以改進的嗎…？ 謝謝！
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.237.129
1F：推 roy047:可先照data sheet的步驟 用牛奶blocking和下抗體減少雜訊 01/05 22:17
2F：→ roy047:因為有時牛奶blocking效果比BSA好 01/05 22:18
3F：推 qiet:找個postive control一起試試吧 說不定caspase-6沒被切 01/05 22:28
4F：推 alaric:二抗會不太濃了? 照片如果有, 可以po看看. 01/06 13:53
5F：→ kg9101266:有目標蛋白但背景髒可以先試5%milk blocking 如果目標沒 01/06 20:09
6F：→ kg9101266:有消失但背景還是不乾淨 再試5%牛奶+1%BSA(這招很強大) 01/06 20:10
7F：→ blence:試這一類帶有某些activity意涵的Ab沒有比較postive實在不推 01/06 21:58