作者nhxcyge (人生就像个不可逆反应)
看板Biotech
标题[求救] active caspase-6 侦测
时间Sat Jan 5 20:50:14 2013
各位版友好，
想请问一下有没有人用过 cell signaling他们家的cleaved caspase-6 (#9761)
http://tinyurl.com/b76yf56，先前实验发现我的蛋白质(可能是caspase-6的受质)，
有被切的现象，而大小也正好事caspase-6的切位。因此想直接压cleaved caspase-6
的讯号。但在十几kD的位子没看到我预期的讯号，且backgroud颇脏。
我的实验步骤如下：
1、实验的sample (原浓度为1 ug/ul)利用蛋白质沉淀方式浓缩三倍(理论浓度为3 ug/ul)
2、每个lane loading 60 ug的蛋白质。
3、跑12%的gel。
4、Blocking with 3% BSA 1小时。
5、Cleaved caspase-6 (1:1000) O/N.
6、Anti-rabbit (1:2000) 1小时。
请问有什麽地方可以改进的吗…？ 谢谢！
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.237.129
1F：推 roy047:可先照data sheet的步骤 用牛奶blocking和下抗体减少杂讯 01/05 22:17
2F：→ roy047:因为有时牛奶blocking效果比BSA好 01/05 22:18
3F：推 qiet:找个postive control一起试试吧 说不定caspase-6没被切 01/05 22:28
4F：推 alaric:二抗会不太浓了? 照片如果有, 可以po看看. 01/06 13:53
5F：→ kg9101266:有目标蛋白但背景脏可以先试5%milk blocking 如果目标没 01/06 20:09
6F：→ kg9101266:有消失但背景还是不乾净 再试5%牛奶+1%BSA(这招很强大) 01/06 20:10
7F：→ blence:试这一类带有某些activity意涵的Ab没有比较postive实在不推 01/06 21:58