作者spirithorse (咩)
看板Biotech
標題[方法] Migration assay不均勻
時間Tue Jan 1 18:39:40 2013
最近做Migration時好時壞
做三重覆會有其中一個幾乎空白,另外兩個正常
(或是更慘..三個都空白)
本來以為會不會是Fibronectin有問題(配錯??)
但是做了9個well,有4-5個是全空白
或是well中間一圈完全沒細胞 如圖:
http://ppt.cc/BCIb
請問是否有人遇到過類似的問題
或幫我想想大概有哪裡需要注意的眉角
謝謝!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.35.0.61
※ 編輯: spirithorse 來自: 114.35.0.61 (01/01 18:41)
1F：→ gryou:有氣泡？ 01/02 17:30
2F：推 ling0714:我是中間一大坨細胞= = 01/02 17:42
3F：→ isntangel:這是用transwell做的嗎?我是不知道fibronectin要幹嘛 01/02 18:22
4F：→ isntangel:我做的還蠻漂亮的@@~還是做不出~改wound healing看看囉 01/02 18:24
5F：→ isntangel:簡單又省錢^^ 01/02 18:24
6F：→ spirithorse:加入Fibronectin後有敲打plate,確定沒有氣泡 01/02 21:03
7F：→ spirithorse:to instangel..一定要做出來啊!!! 01/02 21:04
8F：→ isntangel:是用來coating嘛？migration不用摳吧? 01/03 02:30
9F：→ hhhhh100000:也有賣coating好fibronectin的transwell 01/03 13:01
10F：推 abcam:可以換換別家的transwell呀... 01/03 21:07
11F：→ abcam:保吉生化學、Coring、BD 都有賣的樣子..我都用過..都不錯! 01/03 21:08
12F：→ keeny:這種情況我遇過,跟細胞大小和爬的速度有關,可以試著放久點 01/08 14:22
13F：→ keeny:不過我建議不要用這種方法實在太主觀,可以用corningHTS 96W 01/08 14:24
14F：→ keeny:最後再去用Calcein AM染,然後讀螢光,客觀又不會被攻擊. 01/08 14:26
15F：→ keeny:我之前被reviewers電的很慘. 01/08 14:28
16F：→ isketo:insert內的體積加到200 ul,可以減少load 後細胞往insert周 01/15 15:00
17F：→ isketo:邊聚集的現象。 01/15 15:02