作者jkq (玩具)
看板Biotech
標題[求救] TA cloning 求救
時間Wed Dec 19 18:22:47 2012
各位高手 請問一下
最近實驗在做TA cloning 用TA cloning vector kit (RBC) 2.7K
接進去的insert 約 1K 藍白篩 protocol上寫選藍色的繼續做
長出了17顆藍色 全挑出來抽質體
質體電泳圖
http://ppt.cc/YK8Q
拿kit 附的 M13 F+R PCR出來沒有東西
接著拿當初 insert設計的primer 有兩支跑出來 但不明顯
PCR電泳圖
http://ppt.cc/fYie
非常奇怪 上面都會有兩條band
而拿兩支有P出來的 作酵素切 不管一刀還是兩刀 都只有上面那兩條band
請問高手們 到底發生了什麼事
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 210.59.89.23
1F：→ huuban:選藍色感覺好妙 ... 我沒有聽過這樣的耶 .. 12/19 18:38
2F：→ bead:我也是，我馬上就去找網路上RBC TA vector的圖 12/19 18:43
protocol 就說 the blue color will continue to develop. 我當初也很納悶
只是他這樣說 我也只能做做看了
※ 編輯: jkq 來自: 210.59.89.37 (12/19 19:17)
3F：→ licat:上面這句話只是說藍色會漸漸變深吧 你還是應該挑白的去做 12/19 21:38
4F：推 conective:他沒有叫你挑藍色的呀？ 12/19 22:03
所以上面那句話不是說藍色可以繼續做下去的意思啊
我決定看了你們的疑問 我還是重做 挑白色的
※ 編輯: jkq 來自: 221.120.6.54 (12/19 22:35)
※ 編輯: jkq 來自: 221.120.6.119 (12/19 22:42)
5F：推 jabari:-.,- lacZ 哭哭中 12/19 23:32
6F：推 conective:你做一組沒有加insert的就會知道為什麼大家會這樣問了 12/19 23:45
7F：→ BGG:挑白的加1,另外你可以放冰箱一短時間再挑, 藍的會更明顯 12/20 00:18
8F：推 hangzer:TA挑藍色的..我第一次聽過= = 沒有先問過做過的人嗎? 12/20 00:23
9F：→ blence:如果不是實驗室第一次碰或沒有學長姊,那就可能被排擠了 12/20 01:20
10F：→ huuban:請問你有沒有先了解藍白篩的原理呢？上網查一查吧:) 12/20 01:32
11F：推 supray:如果盤子沒放很久,不用重做,快把白的挑出來吧 12/20 09:15
12F：→ supray:白的放太久也會變藍就沒得挑了 12/20 09:15
13F：推 muscidae:licat正解 12/20 11:34
14F：→ WinnieDad:沒聽過藍白篩選藍色的… 12/21 15:13
15F：推 hsuwenli:白的加1,沒聽過藍白篩選藍色的… 12/22 23:43
16F：推 dingoxp:M13應該都P的出東西，無論有沒有接上才是，只是長度有差 12/23 20:49