作者jkq (玩具)
看板Biotech
标题[求救] TA cloning 求救
时间Wed Dec 19 18:22:47 2012
各位高手 请问一下
最近实验在做TA cloning 用TA cloning vector kit (RBC) 2.7K
接进去的insert 约 1K 蓝白筛 protocol上写选蓝色的继续做
长出了17颗蓝色 全挑出来抽质体
质体电泳图
http://ppt.cc/YK8Q
拿kit 附的 M13 F+R PCR出来没有东西
接着拿当初 insert设计的primer 有两支跑出来 但不明显
PCR电泳图
http://ppt.cc/fYie
非常奇怪 上面都会有两条band
而拿两支有P出来的 作酵素切 不管一刀还是两刀 都只有上面那两条band
请问高手们 到底发生了什麽事
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 210.59.89.23
1F：→ huuban:选蓝色感觉好妙 ... 我没有听过这样的耶 .. 12/19 18:38
2F：→ bead:我也是，我马上就去找网路上RBC TA vector的图 12/19 18:43
protocol 就说 the blue color will continue to develop. 我当初也很纳闷
只是他这样说 我也只能做做看了
※ 编辑: jkq 来自: 210.59.89.37 (12/19 19:17)
3F：→ licat:上面这句话只是说蓝色会渐渐变深吧 你还是应该挑白的去做 12/19 21:38
4F：推 conective:他没有叫你挑蓝色的呀？ 12/19 22:03
所以上面那句话不是说蓝色可以继续做下去的意思啊
我决定看了你们的疑问 我还是重做 挑白色的
※ 编辑: jkq 来自: 221.120.6.54 (12/19 22:35)
※ 编辑: jkq 来自: 221.120.6.119 (12/19 22:42)
5F：推 jabari:-.,- lacZ 哭哭中 12/19 23:32
6F：推 conective:你做一组没有加insert的就会知道为什麽大家会这样问了 12/19 23:45
7F：→ BGG:挑白的加1,另外你可以放冰箱一短时间再挑, 蓝的会更明显 12/20 00:18
8F：推 hangzer:TA挑蓝色的..我第一次听过= = 没有先问过做过的人吗? 12/20 00:23
9F：→ blence:如果不是实验室第一次碰或没有学长姊,那就可能被排挤了 12/20 01:20
10F：→ huuban:请问你有没有先了解蓝白筛的原理呢？上网查一查吧:) 12/20 01:32
11F：推 supray:如果盘子没放很久,不用重做,快把白的挑出来吧 12/20 09:15
12F：→ supray:白的放太久也会变蓝就没得挑了 12/20 09:15
13F：推 muscidae:licat正解 12/20 11:34
14F：→ WinnieDad:没听过蓝白筛选蓝色的… 12/21 15:13
15F：推 hsuwenli:白的加1,没听过蓝白筛选蓝色的… 12/22 23:43
16F：推 dingoxp:M13应该都P的出东西，无论有没有接上才是，只是长度有差 12/23 20:49