作者carnation (卡內省)
看板Biotech
標題Re: [討論] SDS-PAGE dye轉黃&跑不動的問題
時間Tue Dec 11 20:27:10 2012
藉這篇許久以前的文章，我最近也遇到相同的問題，
不知道原po解決了嗎?
或是大雞還有甚麼其他的辦法?
我的野是dye約跑到距離底部還有1~2cm的地方就開始變黃，
然後band扭曲，再也跑不動，
染色或壓片之後發現 分子量低的都分不開，
所有buffer都重新配置且調過pH
(只有running buffer沒調pH) 還是一樣，
過程中stacking : 60V
seperating: 95V
全程在冰箱跑
我知道bromophenol blue是在pH=3的時候會變黃色，
可我實在想不透buffer的重配了還會有甚麼問題。
我的sample是植物的蛋白質 溶在Tris-HCl裡的，
用之前會加2X sample buffer with 2-ME 加熱95度C五分鐘，
不知道用Tris-HCl溶對整個的pH會有影響嗎?
令外我有看到有國外的網站說如果變黃色的話可以試著在sample 中一點點的 NaOH,
有人試過這方法嗎? 一點點不知道是加多少...
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◆ From: 220.135.248.46
※ 編輯: carnation 來自: 220.135.248.46 (12/11 20:28)
1F：→ blence:gel含的Tris-HCl的配法?過酸或過鹼不斷中和造成的salt過多? 12/11 20:54
2F：→ blence:以前隔壁實驗室跑膠一半之後變黃及需要cooler就是這個問題 12/11 20:56
3F：推 genius012:God 我也有這個問題 不過有時好有時糟 蠻困擾的 12/11 21:24
4F：→ carnation:我的seperating gel是2M TrisHCl pH8.8 稀釋，我再配這 12/11 21:46
5F：→ carnation:buffer的時候很難溶，好不容易靠加熱溶解，調pH的時候 12/11 21:47
6F：→ carnation:也調很久才到8.8 12/11 21:47
7F：→ carnation:另外stacking gel是1M TrisHCl pH6.8稀釋，溶解度還好 12/11 21:48
8F：→ carnation:但調pH也調很久... 12/11 21:48
9F：→ blence:我猜的是配Tris 8.8或6.8stock的過程造成這些問題,而非稀釋 12/11 22:22
10F：推 hangzer:2M和1M會不會太濃? 我們lab是1M和0.5M的 不過6.8本來就要 12/11 23:33
11F：→ hangzer:調很一陣子 12/11 23:34
12F：推 joseph103331:我們都是1.5M....話說變黃色我跑久了還是跑掉 12/12 10:19
13F：→ joseph103331:另外我家跑168V..... 12/12 10:19
14F：→ wadeedaw:可以試試看Tris base 調pH值比較方便 12/12 23:33
15F：→ wadeedaw:不過我有點忘了配膠用的是哪一種tris 明天到實驗室查一下 12/12 23:34
16F：→ carnation:謝謝waddedaw ~ 12/13 08:14
17F：→ Anvec:請用 tris-base 配下層膠唷 沒意外的話配好的 pH 應該是對的 12/13 22:49
18F：→ Anvec:你把緩衝用的溶液從 pH 6.8 滴定到 pH 8.8 它就沒有緩衝效果 12/13 22:49
19F：→ Anvec:那跑到最後 pH 值一定會越來越酸 12/13 22:50