作者carnation (卡内省)
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标题Re: [讨论] SDS-PAGE dye转黄&跑不动的问题
时间Tue Dec 11 20:27:10 2012
藉这篇许久以前的文章，我最近也遇到相同的问题，
不知道原po解决了吗?
或是大鸡还有甚麽其他的办法?
我的野是dye约跑到距离底部还有1~2cm的地方就开始变黄，
然後band扭曲，再也跑不动，
染色或压片之後发现 分子量低的都分不开，
所有buffer都重新配置且调过pH
(只有running buffer没调pH) 还是一样，
过程中stacking : 60V
seperating: 95V
全程在冰箱跑
我知道bromophenol blue是在pH=3的时候会变黄色，
可我实在想不透buffer的重配了还会有甚麽问题。
我的sample是植物的蛋白质 溶在Tris-HCl里的，
用之前会加2X sample buffer with 2-ME 加热95度C五分钟，
不知道用Tris-HCl溶对整个的pH会有影响吗?
令外我有看到有国外的网站说如果变黄色的话可以试着在sample 中一点点的 NaOH,
有人试过这方法吗? 一点点不知道是加多少...
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◆ From: 220.135.248.46
※ 编辑: carnation 来自: 220.135.248.46 (12/11 20:28)
1F：→ blence:gel含的Tris-HCl的配法?过酸或过硷不断中和造成的salt过多? 12/11 20:54
2F：→ blence:以前隔壁实验室跑胶一半之後变黄及需要cooler就是这个问题 12/11 20:56
3F：推 genius012:God 我也有这个问题 不过有时好有时糟 蛮困扰的 12/11 21:24
4F：→ carnation:我的seperating gel是2M TrisHCl pH8.8 稀释，我再配这 12/11 21:46
5F：→ carnation:buffer的时候很难溶，好不容易靠加热溶解，调pH的时候 12/11 21:47
6F：→ carnation:也调很久才到8.8 12/11 21:47
7F：→ carnation:另外stacking gel是1M TrisHCl pH6.8稀释，溶解度还好 12/11 21:48
8F：→ carnation:但调pH也调很久... 12/11 21:48
9F：→ blence:我猜的是配Tris 8.8或6.8stock的过程造成这些问题,而非稀释 12/11 22:22
10F：推 hangzer:2M和1M会不会太浓? 我们lab是1M和0.5M的 不过6.8本来就要 12/11 23:33
11F：→ hangzer:调很一阵子 12/11 23:34
12F：推 joseph103331:我们都是1.5M....话说变黄色我跑久了还是跑掉 12/12 10:19
13F：→ joseph103331:另外我家跑168V..... 12/12 10:19
14F：→ wadeedaw:可以试试看Tris base 调pH值比较方便 12/12 23:33
15F：→ wadeedaw:不过我有点忘了配胶用的是哪一种tris 明天到实验室查一下 12/12 23:34
16F：→ carnation:谢谢waddedaw ~ 12/13 08:14
17F：→ Anvec:请用 tris-base 配下层胶唷 没意外的话配好的 pH 应该是对的 12/13 22:49
18F：→ Anvec:你把缓冲用的溶液从 pH 6.8 滴定到 pH 8.8 它就没有缓冲效果 12/13 22:49
19F：→ Anvec:那跑到最後 pH 值一定会越来越酸 12/13 22:50