作者sa74283 (sa74283)
看板Biotech
標題[求救] mutation的問題
時間Fri Dec 7 15:22:27 2012
最近用quikchange的kit在做mutation
PCR之後有跑gel，可以看到明顯的band
DpnI digest之後做transform
卻沒有colony長出來 QQ
請問可能是哪步驟出問題了嗎??
請大家給我意見吧!!
謝謝~~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.67.249
1F：→ williamyang:recovey time? 12/07 16:19
2F：→ williamyang:recovery, sorry. 12/07 16:20
3F：→ sa74283:1hr or 1hr以上 都有 12/07 16:48
4F：→ blence:TM是建議DpnI切完再跑膠,以免你看的band是uncut 12/07 22:36
5F：→ blence:如果band是真的,colony也沒長,直接從transform問題找起 12/07 22:37
6F：→ sa74283:是指看band是不是linear form的嗎? 12/08 09:45
7F：推 windyflyer:我也用過這組kit 提供我的方法給你參考~ 12/24 18:42
8F：→ windyflyer:我前面步驟都照protocol 但是P完等確定冷卻後(通常都偷 12/24 18:43
9F：→ windyflyer:懶冰4度O/N)然後再加入DpnI反應 接著取10ul去transform 12/24 18:43
10F：→ windyflyer:我用他提供的competent cell很難長 12/24 18:44
11F：→ windyflyer:難長colony 這是我的方法啦@@"有點偏方XDD 12/24 18:44
12F：→ windyflyer:用他的competent cell很難長 所以我用我們家自己做的 12/24 18:45