作者sa74283 (sa74283)
看板Biotech
标题[求救] mutation的问题
时间Fri Dec 7 15:22:27 2012
最近用quikchange的kit在做mutation
PCR之後有跑gel，可以看到明显的band
DpnI digest之後做transform
却没有colony长出来 QQ
请问可能是哪步骤出问题了吗??
请大家给我意见吧!!
谢谢~~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.67.249
1F：→ williamyang:recovey time? 12/07 16:19
2F：→ williamyang:recovery, sorry. 12/07 16:20
3F：→ sa74283:1hr or 1hr以上 都有 12/07 16:48
4F：→ blence:TM是建议DpnI切完再跑胶,以免你看的band是uncut 12/07 22:36
5F：→ blence:如果band是真的,colony也没长,直接从transform问题找起 12/07 22:37
6F：→ sa74283:是指看band是不是linear form的吗? 12/08 09:45
7F：推 windyflyer:我也用过这组kit 提供我的方法给你参考~ 12/24 18:42
8F：→ windyflyer:我前面步骤都照protocol 但是P完等确定冷却後(通常都偷 12/24 18:43
9F：→ windyflyer:懒冰4度O/N)然後再加入DpnI反应 接着取10ul去transform 12/24 18:43
10F：→ windyflyer:我用他提供的competent cell很难长 12/24 18:44
11F：→ windyflyer:难长colony 这是我的方法啦@@"有点偏方XDD 12/24 18:44
12F：→ windyflyer:用他的competent cell很难长 所以我用我们家自己做的 12/24 18:45